重组人血清白蛋白-hGCSF突变体在毕赤酵母中的表达

摘要

目的 通过定点突变,提高融合蛋白HSA-hGCSF的生物活性.方法 结构模拟显示,对hG-CSF中5个氨基酸残基加以突变可以提高其生物活性.通过限制性酶切方法将该突变基因与HSA基因的3′连接,融合基因插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,置于启动子AOX1之后,重组质粒pPIC9K-HSA-hG-CSFm经SalⅠ线性化,电击转化毕赤酵母GS115,摇瓶中进行分泌表达.用MTT比色法测定发酵液上清中融合蛋白的hG-CSF活性.结果 PCR鉴定得到约为2 300 bp的融合基因,测序结果正确.SDS-PAGE和Western blot分析表达的融合蛋白HSA-hGCSFm,表明该蛋白相对分子质量约为85 000,且具有HSA的抗原性,生物活性为1.5×106 IU/mL.结论 分子设计实现了突变体融合蛋白生物活性的提高.