小干扰RNA对缺氧PC12细胞中肌细胞增强因子2A蛋白表达的影响

摘要

目的 研究小干扰RNA(siRNA)对大鼠缺氧PC12细胞中肌细胞增强因子2A(MEF2A)蛋白表达的影响.方法 常规培养和缺氧培养PC12细胞.设计合成和筛选针对MEF2A的siRNA序列(MEF2A-siRNA),构建真核细胞表达载体,用脂质体介导转染PC12细胞.实时荧光定量PCR法检测MEF2A的mRNA表达水平.Western blot检测MEF2A蛋白表达量.结果 在用含有MEF2A基因的靶向抑制序列MEF2A-siRNA转染后PC12细胞中MEF2A mRNA相对表达量(2~(-△△CT))为(0.12±0.03),显著低于常规培养的PC12细胞中的表达量(1.01±0.02),抑制率为88.1%(P＜0.01).Western blot检测表明缺氧组中MEF2A蛋白表达量为(98.4±11.7),显著高于正常对照组的(47.5±7.6)(P＜0.01).与缺氧组相比, MEF2A-siRNA+缺氧组中MEF2A蛋白量下调为(59.3±8.4)(P＜0.01),表明MEF2A-siRNA转染对缺氧诱导PC12细胞中MEF2A蛋白表达的上调有显著抑制作用.结论 缺氧诱导PC12细胞中MEF2A的表达升高,而siRNA转染可以靶向抑制MEF2A基因表达.