脊髓PD-L1在骨癌痛模型小鼠中的表达及其对小鼠痛行为的影响

摘要

目的评价脊髓水平程序性死亡配体1 （programmed cell death ligand-1,PD-L1）在骨癌痛小鼠模型中的作用。方法 SPF级雄性C3H/HeJ小鼠96只,4～6周龄,体质量20～25 g,采用右侧股骨远端骨髓腔接种NCTC 2472纤维肉瘤细胞制备小鼠骨癌痛模型。第一部分实验:C3H/HeJ雄性小鼠64只,采用随机数字表法分为两组（n=32）:假手术组（Sham组）和骨癌痛组（Tumor组）。第二部分实验:C3H/HeJ雄性小鼠32只,采用随机数字表法分为四组（每组n=8）:骨癌痛组（T组）、骨癌痛+鞘内注射PD-L1组（PD-L1组）、骨癌痛+鞘内注射生理盐水组（NS组）和假手术组（S组）。Sham组和Tumor组分别于接种前、接种后4、7、10、14、21 d时进行痛行为学测量,包括机械缩足阈值（PWMT）和自发抬足次数（NSF）,每组于各时点随机处死4只小鼠取脊髓腰膨大,Western blot检测PD-L1的表达。接种瘤细胞后14 d,PD-L1组和NS组小鼠分别单次鞘内注射PD-L1 1μg/5μl和生理盐水5μl。T组、PD-L1组、NS组和S组于接种后14 d、给药前、给药后2、4、6、24 h时测定小鼠PWMT和NSF。结果与Sham组比较,Tumor组接种后7～21 d PMWT降低,NSF增加（P＜0. 05）。与接种前和Sham组比较[接种前（0. 38±0. 06）、Sham组:10 d（0. 35±0. 08）、14 d（0. 38±0. 08）、21 d（0. 36±0. 07）],Tumor组接种后10 d, 14 d,21 d脊髓水平PD-L1表达上调[（0.77±0. 06）、（1. 21±0.04）、（1.18±0.06）]（均P＜0.05）。与NS组比较,PD-L1组给药后2～6 h时PWMT升高[NS组（0.25±0.12）g、（0.25±0.12）g、（0.31±0.12）g,PD-L1组（1.43±0.49）g、（1.35±0.44）g、（0.95±0.26）g],NSF减少[NS组（11.74±1.31）次、（13.78±0.0.91）次、（13.63±1.06）次,PD-L1组（4.90±0.82）次、（4.15±0.71）次、（7.65±0.56）次]（P＜0.05）,直至24 h基本恢复正常。结论小鼠接种肿瘤细胞后脊髓水平PD-L1表达增加,且鞘内注射PD-L1可减轻骨癌痛模型小鼠的疼痛。