大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化后自噬水平的变化

摘要

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化前后自噬水平的变化,进一步研究BMSCs神经分化机制.方法:原代培养大鼠BMSCs,三代后用L-DMEM(2％ DMSO+ 200μmol/L BHA)诱导其向神经细胞分化,采用免疫细胞化学方法检测神经元特异标记物NSE表达,采用RT-PCR方法检测自噬相关基因LC3B、Beclin1、Atg5、Atg7、Atg10的表达,用Western blot及流式细胞术检测了自噬标志蛋白LC3B的表达.结果:大鼠BMSCs传3代后,贴壁的BMSCs可达90％以上,类成纤维细胞样梭形生长,经诱导剂作用5h后,细胞呈现神经细胞样改变,NSE阳性率为(83±5)％.RT-PCR结果表明BMSCs向神经细胞分化后LC3B,Beclin1,Atg5,Atg7,Atg10的表达升高,流式细胞术检测LC3B的平均荧光强度升高,Westem blot结果表明神经分化后LC3B-Ⅱ表达增加.结论:大鼠BMSCs向神经细胞分化后自噬水平增加.