血管内皮生长因子反义核酸对细胞株HL60及耐药细胞株HL60/VCR的抑制作用

摘要

目的 探讨反义血管内皮生长因子(AS-VEGF)对HL60、耐药细胞株HLb0/VCR的影响及其机制,包括基因水平的耐药相关基因(Bcl-2,Mcl-1,MDRl,MRP,GSTπ,TopoⅡα,TopoⅡβ)和蛋白水平的耐药相关蛋白P糖蛋白(P-gp)表达量变化.方法 分子生物学方法构建AS-VEGF表达真核载体,通过脂质体转染技术将其转染至细胞株HL60和耐药细胞株HL30/VCR内,观察并绘制细胞生长曲线,ELISA法检测细胞培养上清VEGF表达量变化,RT-PCR法从mRNA水平检测细胞内耐药相关基因表达,蛋白质印迹方法从蛋白水平检测细胞表面p-gp表达.结果 1.25 mmoL/L的AS-VEGF真核表达载体转染HL60和HL30/VCR细胞株后继续培养24和48 h与未转染组比较均可明显抑制细胞生长,细胞生长减慢;转染组细胞48与24 h相比较VEGF、MDRI、MRP、GSTπ和TopoⅡβ的表达量均明显减少,Bcl-2、Mcl-1和TopoⅡα表达量则无明显变化;转染组HL60/VCR细胞表面p-gP表达量48与24 h相比较也明显减少.结论 AS-VEGF可通过抑制白血病细胞生长,改变细胞内的微环境和细胞膜相关蛋白转运通道,降低细胞解毒能力和自我修复能力逆转白血病细胞多药耐药.