高体积分数氧对小分子干扰RNA介导肺表面活性蛋白A基因沉默后A549细胞的影响

摘要

目的探索小分子干扰RNA（SiRNA）沉默A549细胞肺表面活性蛋白A（SP-A）基因后高体积分数氧（高氧）对其的影响，探讨SP-A蛋白在高氧肺损伤中的作用。方法体外传代培养A549细胞，将细胞随机分为沉默组、对照组。以Lipofectamine2000转染特异性SiRNASP-A转入A549细胞，持续置于高氧（950mlVLO2和50mL／LCO2）中，分别于培养48h、72h、96h提取A549细胞的总蛋白，收集培养上清。采用Western-blot检测SP-A蛋白的表达，噻唑兰（MTF）检测细胞增殖能力，硫代巴比妥酸（TAB）比色法检测培养基上清中丙二醛（MDA）水平。结果序列特异性SiRNA可显著沉默SP-A基因表达，其中SiRNASP-A2的沉默效率最高（97％）。高氧干预下，与对照组相比，沉默组A549细胞SP-A蛋白表达在高氧48h、72h时均显著减少（P均〈0．05），沉默组A549细胞增殖能力在高氧48h、72h、96h均受到明显抑制（P均〈0．05）。但2组问培养基中MDA水平未见明显差异（P〉0．05）。结论SP-A基因沉默后A549细胞抗高氧能力下降，表明SP-A可能在高氧肺损伤过程起保护作用。