高体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞硫氧还蛋白及其还原酶表达的影响

摘要

目的探讨高体积分数氧(高氧)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)硫氧还蛋白(Trx)及硫氧还蛋白还原酶(TrxR)表达的影响。方法无菌条件下取孕19 d SD大鼠的胎鼠肺组织,剪碎。采用1 g/L胰酶和1 g/L胶原酶消化19 d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化、原代培养胎鼠AECⅡ,待其生长至亚融合状态时,随机分为空气和高氧组。于培养箱内静置30 min后,空气组置于同一室内空气中,高氧组通以1 000 mL/L纯氧(2 L/min)10 min;然后密封培养瓶,置培养箱中培养。二组分别培养12、24、48 h,倒置相差显微镜下观察高氧对其细胞形态及活性的影响;并采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其Trx mRNA和TrxR mRNA表达。采用SPSS 13.0软件进行组间两样本均数t检验。结果细胞爬片上AECⅡ纯度为(94±2)%,表明所获细胞适合研究使用。与空气组比较,随时间延长,高氧暴露各时间点AECⅡ生长状态明显不良;悬浮细胞增多,但大多数细胞仍具有活力;高氧暴露可促使AECⅡTrx mRNA、TrxR mRNA表达增加,且二者分别于24 h(t=2.471 P=0.033)和48 h(t=2.916 P=0.015)表达最强。结论高氧暴露可促使胎鼠AECⅡTrx mRNA和TrxR mRNA表达上调;Trx和TrxR的表达上调可能是高氧肺损伤的重要保护作用机制之一。