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重组融合蛋白白细胞介素-17F/His对肺炎链球菌感染小鼠免疫相关炎性因子表达的影响

摘要

目的 通过动物实验观察重组融合蛋白白细胞介素(IL)-17F/His对肺炎链球菌(SP)感染小鼠β-防御素-2(Defb2)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)及IL-4、IFN-γ等免疫相关炎性因子表达的影响,探讨重组融合蛋白IL-17F/His在体内防御SP感染的机制.方法 SPF级BALB/c小鼠随机分为SP感染组、重组融合蛋白干预组和正常对照组,以鼻腔黏膜接种方式建立SP感染模型,以鼻腔黏膜免疫方式进行重组蛋白免疫干预.采用实时荧光定量PCR法检测小鼠肺组织Defb2、MIP-1α和MIP-2β mRNA表达,酶联免疫吸附法测定小鼠肺泡灌洗液(BALF)、脾细胞和纵隔淋巴结细胞培养上清中MIP-1 α、MIP-2β、IL-4及IFN-γ水平,计数BALF中白细胞总数及分类,涂板培养行菌落计数,并对小鼠肺组织行免疫组织化学分析.结果 1.SP感染组小鼠BALF中白细胞总数158.50 ±22.27,中性粒细胞[(5.25±0.42)×106/L]、巨噬细胞[(149.00 ±21.09)×106/L]、淋巴细胞[(3.33±1.77)×106/L]计数均明显高于正常对照组[113.33±15.93、(2.33±0.82) ×106/L、(109.00 ±16.10)×106/L、(2.00 ±0.89)×106/L](U/F=38.097、28.854、32.942、27.810,P均<0.05).与SP感染组比较,重组融合蛋白干预组小鼠BALF中SP的定植密度[2.75(1.15~3.09)×103/L]明显降低(P=0.002),白细胞总数(209.00±18.23)及中性粒细胞[(8.67 ±2.16)×106/L]、巨噬细胞[(193.50±16.50)×106/L]、淋巴细胞[(6.83±1.17) ×106/L]计数均明显升高(U/F=38.097、28.854、32.942、27.810,P均<0.05).2.与SP感染组比较,重组融合蛋白干预组小鼠肺组织中Defb2 mRNA表达水平(31.64±4.97)和MIP-1α mRNA表达水平(5.81±1.09)均明显升高,MIP-2β mRNA表达水平(6.69 ±2.05)明显降低(t=4.889、2.306、3.536,P均<0.05).3.SP感染后小鼠BALF中MIP-1α、MIP-2β、IL-4、IFN-γ水平[(109.99±22.71)ng/L、(228.23 ±29.08)ng/L、(80.55±5.67) ng/L、(93.36 ±8.88) ng/L]均升高.与SP感染组比较,重组融合蛋白干预组MIP-2β水平[(64.15±13.41) ng/L]明显降低,IL-4水平[(92.28±4.52) ng/L]明显升高(H/F=159.298、40.767,P均<0.01).4.SP感染后小鼠脾细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4及IFN-γ水平[(433.80 ±37.34) ng/L、(183.12±10.98) ng/L、(73.54 ±7.38) ng/L、(105.10±8.46) ng/L]均明显升高(P均<0.05).与SP感染组比较,重组融合蛋白干预组MIP-2β、IL-4水平[(255.02 ± 13.95) ng/L、(107.02±7.53) ng/L]明显升高,MIP-1α和IFN-γ水平[(413.61 ±24.23) ng/L、(98.88±5.84) ng/L]均明显降低(P均<0.05).5.免疫组织化学结果显示重组融合蛋白干预组小鼠肺组织中IL-17F及Defb2表达均明显高于感染组,正常对照组未见阳性表达.结论 重组融合蛋白IL-17F/His黏膜免疫小鼠,可明显提高小鼠体内Defb2表达水平,并在基因和蛋白水平影响炎性因子表达,增加感染部位炎性细胞聚集,提高小鼠肺部SP的清除率,增强机体抗感染免疫能力.

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