应用PCR-反向点杂交技术快速检测结核分枝杆菌耐药突变基因

摘要

目的 评价PCR-反向点杂交技术在检测结核分枝杆菌耐药突变基因中的应用价值.方法 选取2014年8月至2015年12月江西省胸科医院住院的部分肺结核患者作为研究对象,共1071例.研究对象均送检了痰液标本,共1071份.所有患者均经病原学或病理学证实,或符合菌阴肺结核诊断标准.采用PCR-反向点杂交技术对研究对象痰标本进行异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)耐药基因检测,并以痰培养阳性标本的药物敏感性试验(简称“药敏试验”)检测结果作为金标准,来验证检测结果的可靠性及评价其检测效能.结果 PCR-反向点杂交检测的1071例患者中,596例结核分枝杆菌阳性,阳性率为55.65％.其中,218例(36.58％)检出H、R、S、E耐药基因突变,分布于所测13个位点.H、R、S、E最常见突变位点分别位于KatG的315M(82.53％,137/166)、rpoB的S531L (69.50％,98/141)、rpsl 的43M(78.65％,70/89)、embB的306M2(55.13％,43/78)和306M1(39.74％,31/78).433例患者标本同时行结核分枝杆菌培养,培养阳性且同时PCR-反向点杂交检测阳性157例.以培养及药敏试验结果为金标准,PCR-反向点杂交法对H、R、S、E的耐药检测经Kappa检验具有较好的一致性(Kappa值分别为0.77、0.73、0.66、0.49);敏感度分别为88.89％(40/45)、79.66％(47/59)、67.57％(25/37)、63.16％ (12/19);特异度分别为91.07％ (102/112)、91.84％ (90/98)、95.00％(114/120)、91.30％(126/138).结论 PCR-反向点杂交技术用于结核分枝杆菌耐药基因检测较为可靠,对早期临床用药具有较好的指导作用.