长效重组人胰岛素原类似物的高密度细胞培养的研究

摘要

本文以长效重组人胰岛素原类似物(SⅡA-0801)的大肠埃希菌工程菌为研究对象,针对采用高细胞密度培养技术表达包涵体重组融合蛋白的关键参数,重点研究了诱导培养基成份(包括碳源、氮源、无机盐、微量元素)、种子细胞密度、IPTG诱导剂的加入量及诱导时间,诱导温度等因素与包涵体表达产量的相关性.结果 发现其融合蛋白的最佳表达培养基:1.5%蛋白胨,1%酵母粉,0.5%NaCl,0.8%葡萄糖和0.2%磷酸盐缓冲液(22mmol/L KH_2PO_4,40mmol/L K_2HPO_4).最佳诱导表达条件为:25%接种量,诱导温度37℃,接种培养1h后添加0.5mmol/L IPTG,继续诱导培养5h,发酵培养的总周期为6h.优化后的培养条件比传统的LB培养基及培养方法,其产量提高了6倍多.该结果为长效重组人胰岛素原类似物(SⅡA-0801)后续的生产工艺研究提供了重要的参考依据.