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表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株的构建及筛选

         

摘要

为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到K pn I酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFPLP7.5-P1-2A-3C.重组载体通过缺失的TK基因与羊痘病毒弱毒株在BHK-21细胞中同源重组,用EGFP作为标记筛选出重组毒株,并进行PCR鉴定、抗原捕获ELISA试验检测及Western blot分析.结果显示该重组弱毒株能在1~10代BHK-21细胞中稳定传代,扩增出约3 000 bp片段,并经测序确证为基因P1-2A-3C;抗原捕获ELISA试验检测均为阳性;Western blot分析表明转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C在感染的GTPV AV41 BHK-21细胞中表达的蛋白可被O型FMDV高免血清特异性识别,并具有反应原性.这些结果表明获得了表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的重组山羊痘弱毒株.

著录项

  • 来源
    《畜牧兽医学报》 |2010年第4期|434-440|共7页
  • 作者单位

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

    中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 S852.659.6;
  • 关键词

    口蹄疫病毒; 启动子P7.5; P1-2A-3C基因; 羊痘病毒;

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