猪流行性腹泻病毒COE基因在毕赤酵母中的表达及生物活性分析

摘要

旨在利用毕赤酵母表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,及研究COE蛋白免疫小鼠后产生抗体的中和病毒的能力.根据PEDV S糖蛋白基因设计引物,取患猪流行性腹泻病(PED)的仔猪肠道组织,抽提PEDV的总mRNA,进行RT PCR扩增,获得PEDV部分保护性抗原基因(COE基因)片段.进一步将COE基因导入毕赤酵母表达载体,构建毕赤酵母表达质粒pPIC9K-COE重组质粒,并电转化入酵母感受态细胞GS115中,筛选高拷贝阳性重组菌进行诱导表达.利用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白及其免疫原性,病毒中和试验评价重组蛋白免疫小鼠后血清抗体的病毒中和能力.RT PCR扩增获得大小为530 bp的PEDV COE基因,该基因在毕赤酵母表达载体中能够正确表达,SDS-PAGE结果显示毕赤酵母表达的COE蛋白大小在27 ku左右,分泌表达量约30 mg·L-1.Western blot表明PEDV COE重组蛋白具有反应原性.中和试验结果表明,PEDV COE重组蛋白免疫小鼠后血清中特异性抗体具有中和活性,中和效价为1:36,而对照则小于1:2.PEDV COE基因可在毕赤酵母中获得分泌表达,且表达的蛋白具有很好的生物学活性.