一种重组SARS病毒基因在多形汉逊酵母中的表达及用途

摘要

本发明属于蛋白质表达基因工程领域，具体地说是利用汉逊酵母作为细胞工厂表达外源基因的产物，由于SARS病毒与汉逊酵母在进化关系上亲缘较远，SARS病毒S、S1、S2和主要抗原表位基因在蛋白翻译过程中其密码子用法与汉逊酵母差别很大，从而导致翻译异常停顿。在SARS病毒S、S1、S2基因和主要抗原表位基因表达产物的产业化生产过程中，本发明按照汉逊酵母高表达基因的密码子用法重新设计SARS病毒S、S1、S2基因和主要抗原表位基因。高表达产物可作为疫苗用于预防SARS病毒引起的非典型性肺炎。本发明设计的基因也可用于与粘膜免疫的霍乱毒素B亚单位基因(专利申请号：03110441.X)在汉逊酵母中融合表达，表达产物可作为口服疫苗。

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质表达基因工程领域，具体地讲是涉及利用SARS病毒重组S、S1、S2和主要抗原表位基因和利用含有这些基因的多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)作为细胞工厂进行高效表达以及利用其表达产物在用于研制预防SARS病毒的疫苗中的应用。

背景技术

SARS病毒是一种新出现的冠状病毒，引起人类的严重急性呼吸系统综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)，为非典型性肺炎的元凶。该病毒基因组为单股正链RNA。该RNA全长约30Kb，是所有RNA病毒中最大的，且具有感染性。SARS病毒的发病机制尚不清楚，其自然宿主范围较广，能在空气、粪便中长时间存活，主要经呼吸道系统传播。慢性感染时可能发生过敏性反应；急性感染之后，还可能发生持续性感染。目前尚无有效的疫苗可以预防。与其它冠状病毒一样，SARS病毒为典型的囊膜病毒，在其囊膜外面暴露有许多糖基化的纤突(Spike)蛋白，即S蛋白。S蛋白由S基因编码，它是由两个接近同样大小的蛋白S1和S2组成，直接与宿主细胞受体结合，通过S1和S2的构象变化，引起细胞融合，并诱导产生中和抗体和细胞免疫。在其他冠状病毒中，S蛋白是病毒中和抗原的主要部位，含有许多抗原表位，并诱导产生中和性抗体和融膜反应。这提示我们可以利用S基因进行SARS病毒疫苗的设计。

发明人利用DNAStar、VectorNTI等软件及其附带的在线分析工具，对美国、加拿大、香港、北京、广州等地的SARS病毒分离株从核苷酸序列到蛋白结构进行了预测和分析。发现目前所有SARS病毒分离株Spike蛋白的差异仅纯在S1上，S2高度保守，而且目前所有SARS病毒分离株蛋白的差异仅纯在S1上，S2高度保守，而且目前所有SARS病毒分离株的S2基因全部一致。S基因全长3768bp，编码1255个氨基酸(AA)。其中1-16AA为信号肽，66-609AA为S1蛋白区，641-1247AA为S2蛋白区。在S2蛋白中，潜在的糖基化位点主要集中在787-1221AA区域，非常类似副粘病毒的融合蛋白(Fusion)。在S2蛋白的1148-1236AA位置，存在一个特殊的Coiled coil结构(1149-1188AA)和亮氨酸拉链(1148-1182AA)及富含Cys的结构(1217-1236AA)，发明人推测该区域可能在SARS病毒与宿主细胞融合时起着非常关键的作用。为此，发明人根据汉逊酵母高表达基因密码子用法表(专利申请号：03110441.X)设计了一系列不同长度的S基因，以在汉逊酵母(Hansenula polymorpha)中高效表达，根据这些基因片段产生的抗体对SARS病毒的阻断效果，确定非典型性肺炎治疗性和预防性疫苗研制的最佳方案。

发明内容

多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)属于甲醇酵母，又称作Pichiaaugusta。它的最适生长温度高，生长速率快，利于大规模发酵生产，可以高效表达许多在其它系统中难以高效表达的基因。由于多形汉逊酵母能够按一定的基因剂量比分步整合多个基因，重组菌可按最佳的比例表达所需的基因，这在其它甲醇酵母中未见报道。此外，多形汉逊酵母具有遗传操作简单、外源基因拷贝数高、外源蛋白产量高、易于工业化生产等优点，是一个优于大肠杆菌和其它酵母(如巴斯德毕赤酵母和啤酒酵母等)的外源基因表达系统，已得到广泛关注。尤其是在分泌型表达中，外源蛋白通过分泌途径可完成蛋白水解成熟、糖基化修饰和二硫键形成等翻译后加工过程，使所表达的蛋白更接近具有生物学活性的天然蛋白形式，又避免了啤酒酵母中的过糖基化现象。但是，SARS病毒与酵母在进化关系上亲缘较远，在蛋白翻译过程中其密码子用法与汉逊酵母差别很大，从而导致翻译异常停顿。至今尚未见到利用汉逊酵母系统表达SARS病毒任何基因的报道。我们利用多形汉逊酵母AS 2.2412(中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC提供)表达SARS病毒S、S1、S2基因及其主要抗原表位基因时，按照多形汉逊酵母高表达基因的密码子用法重新设计了这些编码基因，而使其表达量大大得到了提高。

本发明是基于这样一种发现而完成的。因此，本发明的目的在于提供一种重组SARS病毒S、S1、S2基因及其主要抗原表位基因和利用含有该基因的多形汉逊酵母作为细胞工厂进行高效表达，以及利用这些表达产物在制备SARS病毒基因工程疫苗中的应用。本发明的多形汉逊酵母重组SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因的核苷酸序列分别对应于SEQ ID NO：1-11所示的核苷酸序列，其编码的氨基酸序列分别对应于SEQ ID NO：12-22所示的氨基酸序列。为达，本发明的技术路线是利用多形汉逊酵母高表达基因密码子用法表(如图1所示，中国专利申请号：03110441.X)。根据Genbank上报道的SARS病毒编码的S基因(登录号：AY278554，CUHK-W1株)的核苷酸序列(如图2所示，全长3768bp)，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示(全长1255氨基酸)。根据Vector NTI 8.0软件及其附带的SMART(SimpleModular Architecture Research Tool)等在线程序进行结构域组成、蛋白二级结构、跨膜螺旋、糖基化位点、抗原表位分析。根据分析结果，发明人将SARS病毒S基因的编码蛋白分成S(1-1255AA)、S1(17-640AA)、S1-1(66-609AA)、S1-2(17-232AA)、S1-3(258-572AA)、S2(641-1247AA)、S2-1(641-856AA)、S2-2(883-1197AA)、S2-3(1149-1183AA)、S2-4(1149-1236AA)、S2-5(787-1188AA)共11个区域。按照汉逊酵母高表达基因的密码子用法将S(1-1255AA)、S1(17-640AA)、S1-1(66-609AA)、S1-2(17-232AA)、S1-3(258-572AA)、S2(641-1247AA)、S2-1(641-856AA)、S2-2(883-1197AA)、S2-3(1149-1183AA)、S2-4(1149-1236AA)、S2-5(787-1188AA)区域对应的氨基酸序列转变成核苷酸序列，即得到按照汉逊酵母高表达基因密码子用法设计的编码基因，分别对应于如：SEQ IDNO：1-11所示的核苷酸序列。这些基因(SEQ ID NO：1-11)与SARS病毒相应的编码基因编码的氨基酸同源性为100％，其编码的氨基酸序列分别如(SEQ ID NO：12-22)所示，至于核苷酸序列同源性至少在75％。考虑到汉逊酵母高表达基因对个别同义密码子偏好的摆动以及SARS不同分离株在S1基因编码蛋白上的差异，美国、加拿大、香港、北京、广州等地的SARS病毒分离株的S1基因编码的蛋白共有5个氨基酸差异，而S2基因完全一致。因此，优化的编码重组SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因的核苷酸序列，除SEQ IDNO：1-11所示的核苷酸序列外，由于核苷酸序列突变的缺失、增加仍产生编码相同功能的蛋白的核苷酸序列，应当指出，这些序列分别对应于上述SEQ ID NO：1-11所示的核苷酸序具有至少75％的同源性。以上所述的这些具有至少75％的同源性的核苷酸序列也涉及本发明所要达到的目的之一。由本发明得到的按照汉逊酵母高表达基因密码子用法设计的SARS病毒S、S1、S2基因及其主要抗原表位基因，克服了在汉逊酵母表达系统中的不适应性，从而使这些基因在汉逊酵母中高效表达。在汉逊酵母中表达的SARS病毒S、S1、S2基因及其主要抗原表位基因更安全可靠，与哺乳动物细胞表达产物相比，无潜在的致瘤性。经纯化后可直接在临床上用于预防SARS病毒引起的“非典型性肺炎”，或者与霍乱毒素B亚单位的编码基因(中国专利申请号：03110441.X)融合表达，通过粘膜免疫提高疫苗效果。

本发明的另一个目的在于提供一种利用汉逊酵母高表达基因密码子用法制备SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因编码蛋白的方法，该方法涉及以下步骤：

1.按照多形汉逊酵母高表达基因的密码子用法(图1)，优化设计SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因；

2.通过基因合成仪，人工合成新设计的编码基因；

3.利用中国专利(申请号：03110441.X)中的多形汉逊酵母表达载体pHMOXZ-A(胞内表达)、pHFMDHZ-A(胞内表达)、pHMOXZα-A(分泌型表达)、pHFMDHZα-A(分泌型表达)或者其它任何能在汉逊酵母中整合表达的真核表达载体，构建含有已优化的SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因的重组表达载体；

4.多形汉逊酵母重组SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因编码蛋白的诱导表达；

5.表达产物鉴定和生物学活性鉴定.

按照上述方法步骤获得汉逊酵母(Hansenula polymorpha)高效表达含有SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因的重组子，制备SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因编码蛋白是本技术领域的技术人员能够实现的。

迄今为止，国内外有关SARS病毒S、S1、S2基因及其主要抗原表位基因在汉逊酵母中的表达还未见报道。本发明优化设计的SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因在汉逊酵母中的表达无论表达生物量以及提取制备步骤都优于其它表达体系，使重组SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因编码蛋白的产业化生产和应用成为现实。

附图说明

图1：汉逊酵母高表达基因和低表达基因同义密码子用法比较。高：表示高表达基因；低：表示低表达基因。N为Codon W程序对高、低表达基因进行分类时，每个氨基酸的密码子数目。RSCU(Relative synonymouscodon usage，相对同义密码子用法)，RSCU反映的是一个基因中各个同义密码子的使用情况，其数值等于某个密码子在基因中的实际观测值与各密码子以相同的频率出现时的期望值之间的比值；引入RSCU值可以使不同氨基酸组成的数据库之间进行密码子用法比较。^*@表示高表达基因对应的优越密码子，其中^*为经卡方检验后差异极显著；^@为经卡方检验后差异显著。为本发明中优化设计S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因时选用的密码子

图2：Genbank上报道的SARS病毒的编码的S基因(登录号：AY278554，CUHK-W1株)的核苷酸序列

具体实施方式

以下的实施例可以使本专业技术领域的技术人员更全面的了解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因的设计

1.将图1所述的多形汉逊酵母高表达基因密码子用法表(中国专利申请号：03110441.X)嵌入DNAStar程序

2.根据Genbank上报道的SARS病毒S基因(登录号：AY278554，CUHK-W1株)编码氨基酸对应的位置，通过DNAStar程序将S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因编码对应的氨基酸序列S(1-1255AA)、S1(17-640AA)、S1-1(66-609AA)、S1-2(17-232AA)、S1-3(258-572AA)、S2(641-1247AA)、S2-1(641-856AA)、S2-2(883-1197AA)、S2-3(1149-1183AA)、S2-4(1149-1236AA)、S2-5(787-1188AA)；即SEQ ID NO：12-22分别转变成相应的核苷酸序列，即得到按照汉逊酵母高表达基因的密码子用法设计的编码基因，分别如SEQ ID NO：1-11所示。

3.通过基因合成仪，人工合成新设计的编码基因

实施例2重组表达载体的构建、转化和筛选

1.重组表达载体的构建：利用多形汉逊酵母表达载体pHMOXZ-A(胞内表达)、pHFMDHZ-A(胞内表达)、pHMOXZα-A(分泌型表达)、pHFMDHZα-A(分泌型表达)或者其它任何能在汉逊酵母中整合表达的真核表达载体，构建含有已优化的SARS病毒S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5基因的重组表达载体。上述任何一种重组表达载体都可在多形汉逊酵母中高效表达。

2.重组表达载体的转化和筛选：采用电穿孔转化法转化多形汉逊酵母。挑多形汉逊酵母NCYC495单克隆于5mlYPD液体培养基中，37℃过夜培养

3.取2ml菌液加入200ml预温的YPD中，37℃培养至OD600＝1.2-1.5之间(约6h)

4.室温6000rpm离心5min，弃上清

5.用500mlTED(100mM Tris-HCl；50mM EDTA；25mM DTT；pH＝8.0)悬浮细胞

6.37℃摇床，200rpm摇15min

7.4℃离心6000rpm×5min，弃上清

8.用200ml预冷的270mM的蔗糖轻轻悬浮细胞

9.4℃离心6000rpm×5min，弃上清

10.用100ml预冷的270mM的蔗糖轻轻悬浮细胞

11.4℃离心6000rpm×5min，弃上清

12.用1ml预冷的270mM的蔗糖轻轻悬浮细胞，分装成60ul/管，液氮或者-80℃以下冰箱保存备用。

13.在60ul的感受态细胞中加5ul质粒DNA(约100-500ng)，轻轻混匀后加入2mm孔径的电击杯中

14.电击参数：50uF，100Ω，1.5KV

15.电击后立即加940ul的YPDTM(1％酵母提取物；1％蛋白胨；2％葡萄糖；1mM Tris-HCl；1mM MgCl₂)，吸至2-5ml的小管中，37℃摇床，200rpm摇1h

 16.取100ul涂含有Zeocin抗生素(终浓度100ug/ml)的YPD平板，37℃培养2天后，平板上出现大、中、小三种形态的菌落，挑克隆PCR鉴定重组子，用Southern杂交鉴定拷贝数

17.转化子在涂有Zeocin抗生素的YPD(1％酵母提取物、1％蛋白胨、2％葡萄糖)平板上生长筛选。若采用其他能在汉逊酵母中整合表达的载体，可参照该载体的使用手册。提取大菌落酵母的DNA利用PCR方法检测是否有重组子插入。挑取经PCR鉴定正确的克隆进行发酵

实施例3发酵和诱导表达

将含有多拷贝基因的阳性重组子酵母克隆在YPD培养基中37℃培养12小时后，按照1∶20的比例接种新鲜的YPD发酵培养基中(含1.5％甘油)，维持发酵温度30-37℃，pH3-5，溶氧量20％，空气流速5-10L/min。24小时后当O₂压力急剧升高时(提示培养基中的甘油已经消耗完毕)，开始加料(含50％甘油的YPD)，严格控制加料速度，使发酵液中甘油的终浓度维持在0.05％-0.4％之间。发酵24-48小时后，即可收获。对于胞内表达的发酵液，4℃12000rpm×2min离心收获菌体；对于分泌型表达的发酵液，4℃离心收获上清。进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。此外，除用甘油诱导发酵外，多形汉逊酵母表达系统也可以用1％的甲醇和1％葡萄糖诱导发酵。

实施例4表达产物的生物学活性鉴定

将S、S1、S1-1、S1-2、S1-3、S2、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4、S2-5各基因的表达产物纯化后，免疫小鼠，分离血清。在P3以上级别实验室进行病毒阻断试验。在感染SARS病毒的Vero细胞中，能阻断或者抑制病毒复制的血清对应的疫苗为有效疫苗。

                                     序列表<110>中国科学院微生物研究所<120>一种多形汉逊酵母表达严重症急性呼吸系统综合症(SARS)病毒重组S、S1、S2基因和主要抗原表位基因及其用途<141>2003-05-20<160>22<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>3768<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>1atgttcatct tcttgttgtt cttgaccttg acctccggtt ccgacttgga cagatgtacc     60accttcgacg acgtccaagc tccaaactac acccaacaca cctcctccat gagaggtgtc    120tactacccag acgagatctt cagatccgac accttgtact tgacccaaga cttgttcttg    180ccattctact ccaacgtcac cggtttccac accatcaacc acaccttcga caacccagtc    240atcccattca aggacggtat ctacttcgct gctaccgaga agtccaacgt cgtcagaggt    300tgggtcttcg gttccaccat gaacaacaag tcccaatccg tcatcatcat caacaactcc    360accaacgtcg tcatcagagc ttgtaacttc gagttgtgtg acaacccatt cttcgctgtc    420tccaagccaa tgggtaccca aacccacacc atgatcttcg acaacgcttt caactgtacc    480ttcgagtaca tctccgacgc tttctccttg gacgtctccg agaagtccgg taacttcaag    540cacttgagag agttcgtctt caagaacaag gacggtttct tgtacgtcta caagggttac    600caaccaatcg acgtcgtcag agacttgcca tccggtttca acaccttgaa gccaatcttc    660aagttgccat tgggtatcaa catcaccaac ttcagagcta tcttgaccgc tttctcccca    720gctcaagaca cctggggtac ctccgctgct gcttacttcg tcggttactt gaagccaacc    780accttcatgt tgaagtacga cgagaacggt accatcaccg acgctgtcga ctgttcccaa    840aacccattgg ctgagttgaa gtgttccgtc aagtccttcg agatcgacaa gggtatctac    900caaacctcca acttcagagt cgtcccatcc ggtgacgtcg tcagattccc aaacatcacc    960aacttgtgtc cattcggtga ggtcttcaac gctaccaagt tcccatccgt ctacgcttgg   1020gagagaaaga agatctccaa ctgtgtcgct gactactccg tcttgtacaa ctccaccttc   1080ttctccacct tcaagtgtta cggtgtctcc gctaccaagt tgaacgactt gtgtttctcc   1140aacgtctacg ctgactcctt cgtcgtcaag ggtgacgacg tcagacaaat cgctccaggt   1200caaaccggtg tcatcgctga ctacaactac aagttgccag acgacttcat gggttgtgtc   1260ttggcttgga acaccagaaa catcgacgct acctccaccg gtaactacaa ctacaagtac   1320agatacttga gacacggtaa gttgagacca ttcgagagag acatctccaa cgtcccattc   1380tccccagacg gtaagccatg taccccacca gctttgaact gttactggcc attgaacgac   1440tacggtttct acaccaccac cggtatcggt taccaaccat acagagtcgt cgtcttgtcc   1500ttcgagttgt tgaacgctcc agctaccgtc tgtggtccaa agttgtccac cgacttgatc   1560aagaaccaat gtgtcaactt caacttcaac ggtttgaccg gtaccggtgt cttgacccca   1620tcctccaaga gattccaacc attccaacaa ttcggtagag acgtctccga cttcaccgac   1680tccgtcagag acccaaagac ctccgagatc ttggacatct ccccatgttc cttcggtggt   1740gtctccgtca tcaccccagg taccaacgct tcctccgagg tcgctgtctt gtaccaagac   1800gtcaactgta ccgacgtctc caccgctatc cacgctgacc aattgacccc agcttggaga   1860atctactcca ccggtaacaa cgtcttccaa acccaagctg gttgtttgat cggtgctgag   1920cacgtcgaca cctcctacga gtgtgacatc ccaatcggtg ctggtatctg tgcttcctac   1980cacaccgtct ccttgttgag atccacctcc caaaagtcca tcgtcgctta caccatgtcc   2040ttgggtgctg actcctccat cgcttactcc aacaacacca tcgctatccc aaccaacttc   2100tccatctcca tcaccaccga ggtcatgcca gtctccatgg ctaagacctc cgtcgactgt   2160aacatgtaca tctgtggtga ctccaccgag tgtgctaact tgttgttgca atacggttcc   2220ttctgtaccc aattgaacag agctttgtcc ggtatcgctg ctgagcaaga cagaaacacc   2280agagaggtct tcgctcaagt caagcaaatg tacaagaccc caaccttgaa gtacttcggt   2340ggtttcaact tctcccaaat cttgccagac ccattgaagc caaccaagag atccttcatc   2400gaggacttgt tgttcaacaa ggtcaccttg gctgacgctg gtttcatgaa gcaatacggt   2460gagtgtttgg gtgacatcaa cgctagagac ttgatctgtg ctcaaaagtt caacggtttg   2520accgtcttgc caccattgtt gaccgacgac atgatcgctg cttacaccgc tgctttggtc   2580tccggtaccg ctaccgctgg ttggaccttc ggtgctggtg ctgctttgca aatcccattc   2640gctatgcaaa tggcttacag attcaacggt atcggtgtca cccaaaacgt cttgtacgag   2700aaccaaaagc aaatcgctaa ccaattcaac aaggctatct cccaaatcca agagtccttg   2760accaccacct ccaccgcttt gggtaagttg caagacgtcg tcaaccaaaa cgctcaagct   2820ttgaacacct tggtcaagca attgtcctcc aacttcggtg ctatctcctc cgtcttgaac   2880gacatcttgt ccagattgga caaggtcgag gctgaggtcc aaatcgacag attgatcacc   2940ggtagattgc aatccttgca aacctacgtc acccaacaat tgatcagagc tgctgagatc   3000agagcttccg ctaacttggc tgctaccaag atgtccgagt gtgtcttggg tcaatccaag   3060agagtcgact tctgtggtaa gggttaccac ttgatgtcct tcccacaagc tgctccacac   3120ggtgtcgtct tcttgcacgt cacctacgtc ccatcccaag agagaaactt caccaccgct   3180ccagctatct gtcacgaggg taaggcttac ttcccaagag agggtgtctt cgtcttcaac   3240ggtacctcct ggttcatcac ccaaagaaac ttcttctccc cacaaatcat caccaccgac   3300aacaccttcg tctccggtaa ctgtgacgtc gtcatcggta tcatcaacaa caccgtctac   3360gacccattgc aaccagagtt ggactccttc aaggaggagt tggacaagta cttcaagaac   3420cacacctccc cagacgtcga cttgggtgac atctccggta tcaacgcttc cgtcgtcaac   3480atccaaaagg agatcgacag attgaacgag gtcgctaaga acttgaacga gtccttgatc   3540gacttgcaag agttgggtaa gtacgagcaa tacatcaagt ggccatggta cgtctggttg   3600ggtttcatcg ctggtttgat cgctatcgtc atggtcacca tcttgttgtg ttgtatgacc   3660tcctgttgtt cctgtttgaa gggtgcttgt tcctgtggtt cctgttgtaa gttcgacgag   3720gacgactccg agccagtctt gaagggtgtc aagttgcact acacctga                3768<210>2<211>1872<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>2gacagatgta ccaccttcga cgacgtccaa gctccaaact acacccaaca cacctcctcc     60atgagaggtg tctactaccc agacgagatt ttcagatccg acaccttgta cttgacccaa    120gacttgttct tgccattcta ctccaacgtc accggtttcc acaccatcaa ccacaccttc    180gacaacccag tcatcccatt caaggacggt atctacttcg ctgctaccga gaagtccaac    240gtcgtcagag gttgggtctt cggttccacc atgaacaaca agtcccaatc cgtcatcatc    300atcaacaact ccaccaacgt cgtcatcaga gcttgtaact tcgagttgtg tgacaaccca    360ttcttcgctg tctccaagcc aatgggtacc caaacccaca ccatgatctt cgacaacgct    420ttcaactgta ccttcgagta catctccgac gctttctcct tggacgtctc cgagaagtcc    480ggtaacttca agcacttgag agagttcgtc ttcaagaaca aggacggttt cttgtacgtc    540tacaagggtt accaaccaat cgacgtcgtc agagacttgc catccggttt caacaccttg    600aagccaatct tcaagttgcc attgggtatc aacatcacca acttcagagc tatcttgacc    660gctttctccc cagctcaaga cacctggggt acctccgctg ctgcttactt cgtcggttac    720ttgaagccaa ccaccttcat gttgaagtac gacgagaacg gtaccatcac cgacgctgtc    780gactgttccc aaaacccatt ggctgagttg aagtgttccg tcaagtcctt cgagatcgac    840aagggtatct accaaacctc caacttcaga gtcgtcccat ccggtgacgt cgtcagattc    900ccaaacatca ccaacttgtg tccattgggt gaggtcttca acgctaccaa gttcccatcc    960gtctacgctt gggagagaaa gaagatctcc aactgtgtcg ctgactactc cgtcttgtac   1020aactccacct tcttctccac cttcaagtgt tacggtgtct ccgctaccaa gttgaacgac   1080ttgtgtttct ccaacgtcta cgctgactcc ttcgtcgtca agggtgacga cgtcagacaa   1140atcgctccag gtccaaccgg tgtcatcgct gactacaact acaagttgcc agacgacttc   1200atgggttgtg tcttggcttg gaacaccaga aacatcgacg ctacctccac cggtaactac   1260aactacaagt acagatactt gagacacggt aagttgagac cattcgagag agacatctcc   1320aacgtcccat tctccccaga cggtaagcca tgtaccccac cagctttgaa ctgttactgg   1380ccattgaacg actacggttt ctacaccacc accggtatcg gttaccaacc atacagagtc   1440gtcgtcttgt ccttcgagtt gttgaacgct ccagctaccg tctgtggtcc aaagttgtcc   1500accgacttga tcaagaacca atgtgtcaac ttcaacttca acggtttgac cggtaccggt   1560gtcttgaccc catcctccaa gagattccaa ccattccaac aattcggtag agacgtctcc   1620gacttcaccg actccgtcag agacccaaag acctccgaga ttttggacat ctccccatgt   1680tccttcggtg gtgtctccgt catcacccca ggtaccaacg cttcctccga ggtcgctgtc   1740ttgtaccaag acgtcaactg taccgacgtc tccaccgcta tccacgctga ccaattgacc   1800ccagcttgga gaatctactc caccggtaac aacgtcttcc aaacccaagc tggttgtttg   1860atcggtgctg ag                                                       1872<210>3<211>1632<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>3gtcaccggtt tccacaccat caaccacacc ttcgacaacc cagtcatccc attcaaggac     60ggtatctact tcgctgctac cgagaagtcc aacgtcgtca gaggttgggt cttcggttcc    120accatgaaca acaagtccca atccgtcatc atcatcaaca actccaccaa cgtcgtcatc    180agagcttgta acttcgagtt gtgtgacaac ccattcttcg ctgtctccaa gccaatgggt    240acccaaaccc acaccatgat cttcgacaac gctttcaact gtaccttcga gtacatctcc    300gacgctttct ccttggacgt ctccgagaag tccggtaact tcaagcactt gagagagttc    360gtcttcaaga acaaggacgg tttcttgtac gtctacaagg gttaccaacc aatcgacgtc    420gtcagagact tgccatccgg tttcaacacc ttgaagccaa tcttcaagtt gccattgggt    480atcaacatca ccaacttcag agctatcttg accgctttct ccccagctca agacacctgg    540ggtacctccg ctgctgctta cttcgtcggt tacttgaagc caaccacctt catgttgaag    600tacgacgaga acggtaccat caccgacgct gtcgactgtt cccaaaaccc attggctgag    660ttgaagtgtt ccgtcaagtc cttcgagatc gacaagggta tctaccaaac ctccaacttc    720agagtcgtcc catccggtga cgtcgtcaga ttcccaaaca tcaccaactt gtgtccattg    780ggtgaggtct tcaacgctac caagttccca tccgtctacg cttgggagag aaagaagatc    840tccaactgtg tcgctgacta ctccgtcttg tacaactcca ccttcttctc caccttcaag    900tgttacggtg tctccgctac caagttgaac gacttgtgtt tctccaacgt ctacgctgac    960tccttcgtcg tcaagggtga cgacgtcaga caaatcgctc caggtccaac cggtgtcatc   1020gctgactaca actacaagtt gccagacgac ttcatgggtt gtgtcttggc ttggaacacc   1080agaaacatcg acgctacctc caccggtaac tacaactaca agtacagata cttgagacac   1140ggtaagttga gaccattcga gagagacatc tccaacgtcc cattctcccc agacggtaag   1200ccatgtaccc caccagcttt gaactgttac tggccattga acgactacgg tttctacacc   1260accaccggta tcggttacca accatacaga gtcgtcgtct tgtccttcga gttgttgaac   1320gctccagcta ccgtctgtgg tccaaagttg tccaccgact tgatcaagaa ccaatgtgtc   1380aacttcaact tcaacggttt gaccggtacc ggtgtcttga ccccatcctc caagagattc   1440caaccattcc aacaattcgg tagagacgtc tccgacttca ccgactccgt cagagaccca   1500aagacctccg agattttgga catctcccca tgttccttcg gtggtgtctc cgtcatcacc   1560ccaggtacca acgcttcctc cgaggtcgct gtcttgtacc aagacgtcaa ctgtaccgac   1620gtctccaccg ct                                                       1632<210>4<211>648<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>4gacagatgta ccaccttcga cgacgtccaa gctccaaact acacccaaca cacctcctcc     60atgagaggtg tctactaccc agacgagatt ttcagatccg acaccttgta cttgacccaa    120gacttgttct tgccattcta ctccaacgtc accggtttcc acaccatcaa ccacaccttc    180gacaacccag tcatcccatt caaggacggt atctacttcg ctgctaccga gaagtccaac    240gtcgtcagag gttgggtctt cggttccacc atgaacaaca agtcccaatc cgtcatcatc    300atcaacaact ccaccaacgt cgtcatcaga gcttgtaact tcgagttgtg tgacaaccca    360ttcttcgctg tctccaagcc aatgggtacc caaacccaca ccatgatctt cgacaacgct    420ttcaactgta ccttcgagta catctccgac gctttctcct tggacgtctc cgagaagtcc    480ggtaacttca agcacttgag agagttcgtc ttcaagaaca aggacggttt cttgtacgtc    540tacaagggtt accaaccaat cgacgtcgtc agagacttgc catccggttt caacaccttg    600aagccaatct tcaagttgcc attgggtatc aacatcacca acttcaga                 648<210>5<211>945<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>5aagccaacca ccttcatgtt gaagtacgac gagaacggta ccatcaccga cgctgtcgac     60tgttcccaaa acccattggc tgagttgaag tgttccgtca agtccttcga gatcgacaag    120ggtatctacc aaacctccaa cttcagagtc gtcccatccg gtgacgtcgt cagattccca    180aacatcacca acttgtgtcc attgggtgag gtcttcaacg ctaccaagtt cccatccgtc    240tacgcttggg agagaaagaa gatctccaac tgtgtcgctg actactccgt cttgtacaac    300tccaccttct tctccacctt caagtgttac ggtgtctccg ctaccaagtt gaacgacttg    360tgtttctcca acgtctacgc tgactccttc gtcgtcaagg gtgacgacgt cagacaaatc    420gctccaggtc caaccggtgt catcgctgac tacaactaca agttgccaga cgacttcatg    480ggttgtgtct tggcttggaa caccagaaac atcgacgcta cctccaccgg taactacaac    540tacaagtaca gatacttgag acacggtaag ttgagaccat tcgagagaga catctccaac    600gtcccattct ccccagacgg taagccatgt accccaccag ctttgaactg ttactggcca    660ttgaacgact acggtttcta caccaccacc ggtatcggtt accaaccata cagagtcgtc    720gtcttgtcct tcgagttgtt gaacgctcca gctaccgtct gtggtccaaa gttgtccacc    780gacttgatca agaaccaatg tgtcaacttc aacttcaacg gtttgaccgg taccggtgtc    840ttgaccccat cctccaagag attccaacca ttccaacaat tcggtagaga cgtctccgac    900ttcaccgact ccgtcagaga cccaaagacc tccgagattt tggac                    945<210>6<211>1821<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>6cacgtcgaca cctcctacga gtgtgacatc ccaatcggtg ctggtatctg tgcttcctac     60cacaccgtct ccttgttgag atccacctcc caaaagtcca tcgtcgctta caccatgtcc    120ttgggtgctg actcctccat cgcttactcc aacaacacca tcgctatccc aaccaacttc    180tccatctcca tcaccaccga ggtcatgcca gtctccatgg ctaagacctc cgtcgactgt    240aacatgtaca tctgtggtga ctccaccgag tgtgctaact tgttgttgca atacggttcc    300ttctgtaccc aattgaacag agctttgtcc ggtatcgctg ctgagcaaga cagaaacacc    360agagaggtct tcgctcaagt caagcaaatg tacaagaccc caaccttgaa gtacttcggt    420ggtttcaact tctcccaaat cttgccagac ccattgaagc caaccaagag atccttcatc    480gaggacttgt tgttcaacaa ggtcaccttg gctgacgctg gtttcatgaa gcaatacggt    540gagtgtttgg gtgacatcaa cgctagagac ttgatctgtg ctcaaaagtt caacggtttg    600accgtcttgc caccattgtt gaccgacgac atgatcgctg cttacaccgc tgctttggtc    660tccggtaccg ctaccgctgg ttggaccttc ggtgctggtg ctgctttgca aatcccattc    720gctatgcaaa tggcttacag attcaacggt atcggtgtca cccaaaacgt cttgtacgag    780aaccaaaagc aaatcgctaa ccaattcaac aaggctatct cccaaatcca agagtccttg    840accaccacct ccaccgcttt gggtaagttg caagacgtcg tcaaccaaaa cgctcaagct    900ttgaacacct tggtcaagca attgtcctcc aacttcggtg ctatctcctc cgtcttgaac    960gacatcttgt ccagattgga caaggtcgag gctgaggtcc aaatcgacag attgatcacc   1020ggtagattgc aatccttgca aacctacgtc acccaacaat tgatcagagc tgctgagatc   1080agagcttccg ctaacttggc tgctaccaag atgtccgagt gtgtcttggg tcaatccaag   1140agagtcgact tctgtggtaa gggttaccac ttgatgtcct tcccacaagc tgctccacac   1200ggtgtcgtct tcttgcacgt cacctacgtc ccatcccaag agagaaactt caccaccgct   1260ccagctatct gtcacgaggg taaggcttac ttcccaagag agggtgtctt cgtcttcaac   1320ggtacctcct ggttcatcac ccaaagaaac ttcttctccc cacaaatcat caccaccgac   1380aacaccttcg tctccggtaa ctgtgacgtc gtcatcggta tcatcaacaa caccgtctac   1440gacccattgc aaccagagtt ggactccttc aaggaggagt tggacaagta cttcaagaac   1500cacacctccc cagacgtcga cttgggtgac atctccggta tcaacgcttc cgtcgtcaac   1560atccaaaagg agatcgacag attgaacgag gtcgctaaga acttgaacga gtccttgatc   1620gacttgcaag agttgggtaa gtacgagcaa tacatcaagt ggccatggta cgtctggttg   1680ggtttcatcg ctggtttgat cgctatcgtc atggtcacca tcttgttgtg ttgtatgacc   1740tcctgttgtt cctgtttgaa gggtgcttgt tcctgtggtt cctgttgtaa gttcgacgag   1800gacgactccg agccagtctt g                                             1821<210>7<211>648<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>7cacgtcgaca cctcctacga gtgtgacatc ccaatcggtg ctggtatctg tgcttcctac     60cacaccgtct ccttgttgag atccacctcc caaaagtcca tcgtcgctta caccatgtcc    120ttgggtgctg actcctccat cgcttactcc aacaacacca tcgctatccc aaccaacttc    180tccatctcca tcaccaccga ggtcatgcca gtctccatgg ctaagacctc cgtcgactgt    240aacatgtaca tctgtggtga ctccaccgag tgtgctaact tgttgttgca atacggttcc    300ttctgtaccc aattgaacag agctttgtcc ggtatcgctg ctgagcaaga cagaaacacc    360agagaggtct tcgctcaagt caagcaaatg tacaagaccc caaccttgaa gtacttcggt    420ggtttcaact tctcccaaat cttgccagac ccattgaagc caaccaagag atccttcatc    480gaggacttgt tgttcaacaa ggtcaccttg gctgacgctg gtttcatgaa gcaatacggt    540gagtgtttgg gtgacatcaa cgctagagac ttgatctgtg ctcaaaagtt caacggtttg    600accgtcttgc caccattgtt gaccgacgac atgatcgctg cttacacc                 648<210>8<211>945<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>8caaatggctt acagattcaa cggtatcggt gtcacccaaa acgtcttgta cgagaaccaa     60aagcaaatcg ctaaccaatt caacaaggct atctcccaaa tccaagagtc cttgaccacc    120acctccaccg ctttgggtaa gttgcaagac gtcgtcaacc aaaacgctca agctttgaac    180accttggtca agcaattgtc ctccaacttc ggtgctatct cctccgtctt gaacgacatc    240ttgtccagat tggacaaggt cgaggctgag gtccaaatcg acagattgat caccggtaga    300ttgcaatcct tgcaaaccta cgtcacccaa caattgatca gagctgctga gatcagagct    360tccgctaact tggctgctac caagatgtcc gagtgtgtct tgggtcaatc caagagagtc    420gacttctgtg gtaagggtta ccacttgatg tccttcccac aagctgctcc acacggtgtc    480gtcttcttgc acgtcaccta cgtcccatcc caagagagaa acttcaccac cgctccagct    540atctgtcacg agggtaaggc ttacttccca agagagggtg tcttcgtctt caacggtacc    600tcctggttca tcacccaaag aaacttcttc tccccacaaa tcatcaccac cgacaacacc    660ttcgtctccg gtaactgtga cgtcgtcatc ggtatcatca acaacaccgt ctacgaccca    720ttgcaaccag agttggactc cttcaaggag gagttggaca agtacttcaa gaaccacacc    780tccccagacg tcgacttggg tgacatctcc ggtatcaacg cttccgtcgt caacatccaa    840aaggagatcg acagattgaa cgaggtcgct aagaacttga acgagtcctt gatcgacttg    900caagagttgg gtaagtacga gcaatacatc aagtggccat ggtac                    945<210>9<211>120<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>9ggtgacatct ccggtatcaa cgcttccgtc gtcaacatcc aaaaggagat cgacagattg     60aacgaggtcg ctaagaactt gaacgagtcc ttgatcgact tgcaagagtt gggtaagtac    120<210>10<211>264<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>10ggtgacatct ccggtatcaa cgcttccgtc gtcaacatcc aaaaggagat cgacagattg     60aacgaggtcg ctaagaactt gaacgagtcc ttgatcgact tgcaagagtt gggtaagtac    120gagcaataca tcaagtggcc atggtacgtc tggttgggtt tcatcgctgg tttgatcgct    180atcgtcatgg tcaccatctt gttgtgttgt atgacctcct gttgttcctg tttgaagggt    240gcttgttcct gtggttcctg ttgt                                           264<210>11<211>1206<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>根据多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha)高表达基因密码子用法设计<400>11atcttgccag acccattgaa gccaaccaag agatccttca tcgaggactt gttgttcaac     60aaggtcacct tggctgacgc tggtttcatg aagcaatacg gtgagtgttt gggtgacatc    120aacgctagag acttgatctg tgctcaaaag ttcaacggtt tgaccgtctt gccaccattg    180ttgaccgacg acatgatcgc tgcttacacc gctgctttgg tctccggtac cgctaccgct    240ggttggacct tcggtgctgg tgctgctttg caaatcccat tcgctatgca aatggcttac    300agattcaacg gtatcggtgt cacccaaaac gtcttgtacg agaaccaaaa gcaaatcgct    360aaccaattca acaaggctat ctcccaaatc caagagtcct tgaccaccac ctccaccgct    420ttgggtaagt tgcaagacgt cgtcaaccaa aacgctcaag ctttgaacac cttggtcaag    480caattgtcct ccaacttcgg tgctatctcc tccgtcttga acgacatctt gtccagattg    540gacaaggtcg aggctgaggt ccaaatcgac agattgatca ccggtagatt gcaatccttg    600caaacctacg tcacccaaca attgatcaga gctgctgaga tcagagcttc cgctaacttg    660gctgctacca agatgtccga gtgtgtcttg ggtcaatcca agagagtcga cttctgtggt    720aagggttacc acttgatgtc cttcccacaa gctgctccac acggtgtcgt cttcttgcac    780gtcacctacg tcccatccca agagagaaac ttcaccaccg ctccagctat ctgtcacgag    840ggtaaggctt acttcccaag agagggtgtc ttcgtcttca acggtacctc ctggttcatc    900acccaaagaa acttcttctc cccacaaatc atcaccaccg acaacacctt cgtctccggt    960aactgtgacg tcgtcatcgg tatcatcaac aacaccgtct acgacccatt gcaaccagag   1020ttggactcct tcaaggagga gttggacaag tacttcaaga accacacctc cccagacgtc   1080gacttgggtg acatctccgg tatcaacgct tccgtcgtca acatccaaaa ggagatcgac   1140agattgaacg aggtcgctaa gaacttgaac gagtccttga tcgacttgca agagttgggt   1200aagtac                                                              1206<210>12<211>1255<212>PRT<213>Coronavirus<400>1Met Phe Ile Phe Leu Leu Phe Leu Thr Leu Thr Ser Gly Ser Asp Leu1               5                   10                  15Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gln Ala Pro Asn Tyr Thr Gln

        20                  25                  30His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu Ile Phe Arg

    35                  40                  45Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Tyr Ser

50                  55                  60Asn Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Asp Asn Pro Val65                  70                  75                  80Ile Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu Lys Ser Asn

            85                  90                  95Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn Lys Ser Gln

        100                 105                 110Ser Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile Arg Ala Cys

    115                 120                 125Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser Lys Pro Met

130                 135                 140Gly Thr Gln Thr His Thr Met Ile Phe Asp Asn Ala Phe Asn Cys Thr145                 150                 155                 160Phe Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser

            165                 170                 175Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly

        180                 185                 190Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro Ile Asp Val Val Arg Asp

    195                 200                 205Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro Ile Phe Lys Leu Pro Leu

210                 215                 220Gly Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg Ala Ile Leu Thr Ala Phe Ser Pro225                 230                 235                 240Ala Gln Asp Thr Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe Val Gly Tyr

            245                 250                 255Leu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr Ile

        260                 265                 270Thr Asp Ala Val Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys

    275                 280                 285Ser Val Lys Ser Phe Glu Ile Asp Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn

290                 295                 300Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr305                 310                 315                 320Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser

            325                 330                 335Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr

        340                 345                 350Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly

    355                 360                 365Val Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala

370                 375                 380Asp Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly385                 390                 395                 400Gln Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe

            405                 410                 415Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser

        420                 425                 430Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu

    435                 440                 445Arg Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly

450                 455                 460Lys Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp465                 470                 475                 480Tyr Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

            485                 490                 495Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

        500                 505                 510Pro Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe Asn

    515                 520                 525Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser Ser Lys Arg

530                 535                 540Phe Gln Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp Phe Thr Asp545                 550                 555                 560Ser Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu Ile Leu Asp Ile Ser Pro Cys

            565                 570                 575Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Ala Ser Ser

        580                 585                 590Glu Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Asp Val Ser Thr

    595                 600                 605Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Ala Trp Arg Ile Tyr Ser Thr

610                 615                 620Gly Asn Asn Val Phe Gln Thr Gln Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu625                 630                 635                 640His Val Asp Thr Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile

            645                 650                 655Cys Ala Ser Tyr His Thr Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr Ser Gln Lys

        660                 665                 670Ser Ile Val Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Asp Ser Ser Ile Ala

    675                 680                 685Tyr Ser Asn Asn Thr Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Ser Ile Ser Ile

690                 695                 700Thr Thr Glu Val Met Pro Val Ser Met Ala Lys Thr Ser Val Asp Cys705                 710                 715                 720Asn Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ala Asn Leu Leu Leu

            725                 730                 735Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Ser Gly Ile

        740                 745                 750Ala Ala Glu Gln Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val Phe Ala Gln Val Lys

    755                 760                 765Gln Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe Gly Gly Phe Asn Phe

770                 775                 780Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr Lys Arg Ser Phe Ile785                 790                 795                 800Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Met

            805                 810                 815Lys Gln Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp Ile Asn Ala Arg Asp Leu Ile

        820                 825                 830Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr

    835                 840                 845Asp Asp Met Ile Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu Val Ser Gly Thr Ala

850                 855                 860Thr Ala Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe865                 870                 875                 880Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn

            885                 890                 895Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Gln Ile Ala Asn Gln Phe Asn Lys Ala

        900                 905                 910Ile Ser Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr Ala Leu Gly

    915                 920                 925Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu

930                 935                 940Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn945                 950                 955                 960Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp

            965                 970                 975Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln

        980                 985                 990Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala

    995                 1000                1005Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp

1010                1015                1020Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ala Ala

1025                1030                1035Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser Gln

1040                1045                1050Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Glu Gly Lys

1055                1060                1065Ala Tyr Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Phe Asn Gly Thr Ser

1070                1075                1080Trp Phe Ile Thr Gln Arg Asn Phe Phe Ser Pro Gln Ile Ile Thr

1085                1090                1095Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly

1100                1105                1110Ile Ile Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp

1115                1120                1125Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser

1130                1135                1140Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val

1145                1150                1155Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys

1160                1165                1170Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr

1175                1180                1185Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu Gly Phe Ile

1190                1195                1200Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Leu Leu Cys Cys

1205                1210                1215Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Ala Cys Ser Cys Gly

1220                1225                1230Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu Lys

1235                1240                1245Gly Val Lys Leu His Tyr Thr

1250                1255<210>13<211>624<212>PRT<213>Coronavirus<400>13Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gln Ala Pro Asn Tyr Thr Gln1               5                   10                  15His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu Ile Phe Arg

        20                  25                  30Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Tyr Ser

    35                  40                  45Asn Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Asp Asn Pro Val

50                  55                  60Ile Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu Lys Ser Asn65                  70                  75                  80Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn Lys Ser Gln

            85                  90                  95Ser Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile Arg Ala Cys

        100                 105                 110Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser Lys Pro Met

    115                 120                 125Gly Thr Gln Thr His Thr Met Ile Phe Asp Asn Ala Phe Asn Cys Thr

130                 135                 140Phe Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser145                 150                 155                 160Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly

            165                 170                 175Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro Ile Asp Val Val Arg Asp

        180                 185                 190Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro Ile Phe Lys Leu Pro Leu

    195                 200                 205Gly Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg Ala Ile Leu Thr Ala Phe Ser Pro

210                 215                 220Ala Gln Asp Thr Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe Val Gly Tyr225                 230                 235                 240Leu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr Ile

            245                 250                 255Thr Asp Ala Val Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys

        260                 265                 270Ser Val Lys Ser Phe Glu Ile Asp Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn

    275                 280                 285Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr

290                 295                 300Asn Leu Cys Pro Leu Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser305                 310                 315                 320Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr

            325                 330                 335Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly

        340                 345                 350Val Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala

    355                 360                 365Asp Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly

370                 375                 380Pro Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe385                 390                 395                 400Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser

            405                 410                 415Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu

        420                 425                 430Arg Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly

    435                 440                 445Lys Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp

450                 455                 460Tyr Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val465                 470                 475                 480Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

            485                 490                 495Pro Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe Asn

        500                 505                 510Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser Ser Lys Arg

    515                 520                 525Phe Gln Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp Phe Thr Asp

530                 535                 540Ser Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu Ile Leu Asp Ile Ser Pro Cys545                 550                 555                 560Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Ala Ser Ser

            565                 570                 575Glu Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Asp Val Ser Thr

        580                 585                 590Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Ala Trp Arg Ile Tyr Ser Thr

    595                 600                 605Gly Asn Asn Val Phe Gln Thr Gln Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu

610                 615                 620<210>14<211>544<212>PRT<213>Coronavirus<400>14Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Asp Asn Pro Val Ile1               5                   10                  15Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu Lys Ser Asn Val

        20                  25                  30Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn Lys Ser Gln Ser

    35                  40                  45Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile Arg Ala Cys Asn

50                  55                  60Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser Lys Pro Met Gly65                  70                  75                  80Thr Gln Thr His Thr Met Ile Phe Asp Asn Ala Phe Asn Cys Thr Phe

            85                  90                  95Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser Gly

        100                 105                 110Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly Phe

    115                 120                 125Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro Ile Asp Val Val Arg Asp Leu

130                 135                 140Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro Ile Phe Lys Leu Pro Leu Gly145                 150                 155                 160Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg Ala Ile Leu Thr Ala Phe Ser Pro Ala

            165                 170                 175Gln Asp Thr Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe Val Gly Tyr Leu

        180                 185                 190Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr Ile Thr

    195                 200                 205Asp Ala Val Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys Ser

210                 215                 220Val Lys Ser Phe Glu Ile Asp Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe225                 230                 235                 240Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

            245                 250                 255Leu Cys Pro Leu Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser Val

        260                 265                 270Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

    275                 280                 285Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

290                 295                 300Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala Asp305                 310                 315                 320Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Pro

            325                 330                 335Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Met

        340                 345                 350Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser Thr

    355                 360                 365Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu Arg

370                 375                 380Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly Lys385                 390                 395                 400Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp Tyr

            405                 410                 415Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val

        420                 425                 430Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro

    435                 440                 445Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe Asn Phe

450                 455                 460Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser Ser Lys Arg Phe465                 470                 475                 480Gln Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp Phe Thr Asp Ser

            485                 490                 495Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu Ile Leu Asp Ile Ser Pro Cys Ser

        500                 505                 510Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Ala Ser Ser Glu

    515                 520             525Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Asp Val Ser Thr Ala

530                 535             540<210>15<211>216<212>PRT<213>Coronavirus<400>15Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gln Ala Pro Asn Tyr Thr Gln1               5                   10                  15His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu Ile Phe Arg

        20                  25                  30Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Tyr Ser

    35                  40                  45Asn Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Asp Asn Pro Val

50                  55                  60Ile Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu Lys Ser Asn65                  70                  75                  80Val Val Arg Gly Trp ValPhe Gly Ser Thr Met Asn Asn Lys Ser Gln

            85                 90                  95Ser Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile Arg Ala Cys

        100                 105                 110Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser Lys Pro Met

    115                 120                 125Gly Thr Gln Thr His Thr Met Ile Phe Asp Asn Ala Phe Asn Cys Thr

130                 135                 140Phe Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser145                 150                 155                 160Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly

            165                 170                 175Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro Ile Asp Val Val Arg Asp

        180                 185                 190Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro Ile Phe Lys Leu Pro Leu

    195                 200                 205Gly Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg

210                 215<210>16<211>315<212>PRT<213>Coronavirus<400>16Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr Ile Thr1               5                   10                  15Asp Ala Val Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys Ser

        20                  25                  30Val Lys Ser Phe Glu Ile Asp Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe

    35                  40                  45Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

50                  55                  60Leu Cys Pro Leu Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser Val65                  70                  75                  80Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

            85                  90                  95Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

        100                 105                 110Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala Asp

    115                 120                 125Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Pro

130                 135                 140Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Met145                 150                 155                 160Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser Thr

            165                 170                 175Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu Arg

        180                 185                 190Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly Lys

    195                 200                 205Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp Tyr

210                 215                 220Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val225                 230                 235                 240Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro

            245                 250                 255Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe Asn Phe

        260                 265                 270Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser Ser Lys Arg Phe

    275                 280                 285Gln Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp Phe Thr Asp Ser

290                 295                 300Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu Ile Leu Asp305                 310                 315<210>17<211>607<212>PRT<213>Coronavirus<400>17His Val Asp Thr Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile1               5                   10                  15Cys Ala Ser Tyr His Thr Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr Ser Gln Lys

        20                  25                  30Ser Ile Val Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Asp Ser Ser Ile Ala

    35                  40                  45Tyr Ser Asn Asn Thr Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Ser Ile Ser Ile

50                  55                  60Thr Thr Glu Val Met Pro Val Ser Met Ala Lys Thr Ser Val Asp Cys65                  70                  75                  80Asn Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ala Asn Leu Leu Leu

            85                  90                  95Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Ser Gly Ile

        100                 105                 110Ala Ala Glu Gln Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val Phe Ala Gln Val Lys

    115                 120                 125Gln Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe Gly Gly Phe Asn Phe

130                 135                 140Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr Lys Arg Ser Phe Ile145                 150                 155                 160Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Met

            165                 170                 175Lys Gln Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp Ile Asn Ala Arg Asp Leu Ile

        180                 185                 190Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr

    195                 200                 205Asp Asp Met Ile Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu Val Ser Gly Thr Ala

210                 215                 220Thr Ala Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe225                 230                 235                 240Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn

            245                 250                 255Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Gln Ile Ala Asn Gln Phe Asn Lys Ala

        260                 265                 270Ile Ser Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr Ala Leu Gly

    275                 280                 285Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu

290                 295                 300Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn305                 310                 315                 320Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp

            325                 330                 335Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln

        340                 345                 350Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala

    355                 360                 365Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe

370                 375                 380Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ala Ala Pro His385                 390                 395                 400Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser Gln Glu Arg Asn

            405                 410                 415Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Glu Gly Lys Ala Tyr Phe Pro

        420                 425                 430Arg Glu Gly Val Phe Val Phe Asn Gly Thr Ser Trp Phe Ile Thr Gln

    435                 440                 445Arg Asn Phe Phe Ser Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val

450                 455                 460Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Ile Asn Asn Thr Val Tyr465                 470                 475                 480Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys

            485                 490                 495Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser

        500                 505                 510Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu

    515                 520                 525Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu

530                 535                 540Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu545                 550                 555                 560Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Leu Leu

            565                 570                 575Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Ala Cys Ser Cys

        580                 585                 590Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu

    595                 600                 605<210>18<211>216<212>PRT<213>Coronavirus<400>18His Val Asp Thr Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile1               5                   10                  15Cys Ala Ser Tyr His Thr Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr Ser Gln Lys

        20                  25                  30Ser Ile Val Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Asp Ser Ser Ile Ala

    35                  40                  45Tyr Ser Asn Asn Thr Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Ser Ile Ser Ile

50                  55                  60Thr Thr Glu Val Met Pro Val Ser Met Ala Lys Thr Ser Val Asp Cys65                  70                  75                  80Asn Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ala Asn Leu Leu Leu

            85                  90                  95Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Ser Gly Ile

        100                 105                 110Ala Ala Glu Gln Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val Phe Ala Gln Val Lys

    115                 120                 125Gln Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe Gly Gly Phe Asn Phe

130                 135                 140Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr Lys Arg Ser Phe Ile145                 150                 155                 160Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Met

            165                 170                 175Lys Gln Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp Ile Asn Ala Arg Asp Leu Ile

        180                 185                 190Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr

    195                 200                 205Asp Asp Met Ile Ala Ala Tyr Thr

210                 215<210>19<211>315<212>PRT<213>Coronavirus<400>19Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val Leu1               5                   10                  15Tyr Glu Asn Gln Lys Gln Ile Ala Asn Gln Phe Asn Lys Ala Ile Ser

        20                  25                  30Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr Ala Leu Gly Lys Leu

    35                  40                  45Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys

50                  55                  60Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile65                  70                  75                  80Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu

            85                  90                  95Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu

        100                 105                 110Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys

    115                 120                 125Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly

130                 135                 140Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ala Ala Pro His Gly Val145                 150                 155                 160Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser Gln Glu Arg Asn Phe Thr

            165                 170                 175Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Glu Gly Lys Ala Tyr Phe Pro Arg Glu

        180                 185                 190Gly Val Phe Val Phe Asn Gly Thr Ser Trp Phe Ile Thr Gln Arg Asn

    195                 200                 205Phe Phe Ser Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly

210                 215                 220Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Ile Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro225                 230                 235                 240Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe

            245                 250                 255Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile

        260                 265                 270Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu

    275                 280                 285Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly

290                 295                 300Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr305                 310                 315<210>20<211>40<212>PRT<213>Coronavirus<400>20Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu1               5                   10                  15Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile

        20                  25                  30Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr

    35                  40<210>21<211>88<212>PRT<213>Coronavirus<400>21Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu1               5                   10                  15Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile

        20                  25                  30Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp

    35                  40                  45Tyr Val Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val

 50                 55                  60Thr Ile Leu Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly65                  70                  75                  80Ala Cys Ser Cys Gly Ser Cys Cys

            85<210>22<211>402<212>PRT<213>Coronavirus<400>22Ile Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp1               5                   I0                  15Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Met Lys Gln

        20                  25                  30Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp Ile Asn Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala

    35                  40                  45Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Asp

50                  55                  60Met Ile Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu Val Ser Gly Thr Ala Thr Ala65                  70                  75                  80Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met

            85                  90                  95Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val Leu

        100                 105                 110Tyr Glu Asn Gln Lys Gln Ile Ala Asn Gln Phe Asn Lys Ala Ile Ser

    115                 120                 125Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr Ala Leu Gly Lys Leu

130                 135                 140Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys145                 150                 155                 160Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile

            165                 170                 175Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu

        180                 185                 190Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu

    195                 200                 205Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys

210                 215                 220Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly225                 230                 235                 240Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ala Ala Pro His Gly Val

            245                 250                 255Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser Gln Glu Arg Asn Phe Thr

        260                 265                 270Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Glu Gly Lys Ala Tyr Phe Pro Arg Glu

    275                 280                 285Gly Val Phe Val Phe Asn Gly Thr Ser Trp Phe Ile Thr Gln Arg Asn

290                 295                 300Phe Phe Ser Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly305                 310                 315                 320Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Ile Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro

            325                 330                 335Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe

        340                 345                 350Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile

    355                 360                 365Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu

370                 375                 380Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly385                 390                 395                 400Lys Tyr