单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究

摘要

拟构建单核细胞增生李斯特菌(LM)非编码RNA rli87基因缺失株,对其进行分子鉴定,分析rli87基因缺失对LM生长的影响.用融合PCR方法构建LM-SB5 rli87基因缺失突变体,并构建pKSV7-Δrli87穿梭载体,将其转化入LM-SB5感受态细胞,利用温度(42℃)和氯霉素(10 μg·mL-1)的抗性双重压力来实现同源重组,筛选同源重组菌进行分子鉴定,测定缺失株与母源野毒株37℃条件下生长曲线.结果显示:PCR和测序结果证实成功获得了LM-Δrli87重组菌.通过25代的连续传代,PCR鉴定结果显示,该缺失株具有良好的遗传稳定性.与野毒株进行对比,在37℃条件下缺失株与野毒株的生长差异不显著(P＞0.05).非编码RNA rli87基因在37℃条件下对LM生长没有明显的调控作用.