AMPK调控绵羊肌内前体脂肪细胞分化的研究

摘要

旨在研究AMPK在羔羊肌内前体脂肪细胞分化中的作用及机制.本研究采集3日龄羔羊背最长肌,采用差速贴壁法分离肌束膜中原代细胞.改变AMPK与Wnt信号通路的活性并诱导细胞成脂分化,采用qRT-PCR和Western blot方法检测脂肪细胞分化关键基因及蛋白的表达,应用油红O染色观察成熟脂肪细胞的油滴情况.结果表明,AMPK激活明显减少了油红的着色,极显著抑制了PPARγ、C/EBPα和aP2成脂关键基因的mRNA表达及降低了对应的蛋白含量(P＜0.01),而抑制AMPK活性则表现出相反的结果.激活Wnt信号通路活性抑制了肌内前体脂肪细胞的分化,极显著降低PPARγ(P＜0.01)和C/EBPα(P＜0.01) mRNA表达,显著减少aP2的mRNA表达(P＜0.05),极显著降低了对应蛋白的含量(P＜0.01),而抑制Wnt信号通路活性则促进了细胞的成脂分化.AMPK的活性变化未影响β-catenin的转录,但极显著改变了β-catenin的蛋白表达水平(P＜0.01).进一步研究表明,AMPK活化后极显著增加了GSK3β的磷酸化水平(P＜0.01),降低了其活性.结果显示,AMPK通过改变GSK3β的磷酸化水平影响胞内β-catenin稳定性,进而影响羔羊肌内前体脂肪细胞的成脂分化.