DKK2基因质粒的构建及其在敖汉细毛羊成纤维细胞中表达量的研究

摘要

本研究旨在探究DKK2基因过表达后在敖汉细毛羊成纤维细胞中的表达量变化。采集40日龄敖汉细毛羊胎羊皮肤组织作为实验样品,首先参照GenBank中绵羊的DKK2基因序列信息进行引物设计,通过PCR反应对DKK2基因进行扩增,并与pGM-T载体进行连接反应,构建了pGM-T-DKK2重组质粒;将克隆载体转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,进行目的片段的克隆;鉴定正确后构建pcDNA3.1-DKK2重组质粒;并将pcDNA3.1-DKK2重组质粒转染敖汉细毛羊成纤维细胞,检测过表达载体对成纤维细胞DKK2基因的表达水平变化。酶切、测序鉴定结果显示,成功构建了pcDNA3.1-DKK2过表达载体,并且转染敖汉细毛羊成纤维细胞后DKK2基因实验组的表达量极显著高于对照组;Western Blot实验结果显示,实验组的蛋白表达水平极显著高于对照组。本实验成功构建了pcDNA3.1-DKK2过表达载体,并成功转染了敖汉细毛羊成纤维细胞,为进一步研究DKK2基因的功能奠定了基础。