电穿孔导入绿色荧光蛋白基因于绵羊胎儿成纤维细胞研究

摘要

本文应用质粒pEGFP-Cl带有水母绿色荧光蛋白(GFP)基因和新霉素抗性基因(Neor)两种报告基因转染胎儿成纤维细胞,进行转染条件优化.首先,通过成活率确定转染脉冲时程和场强,发现有三种组合是最适的组合,它们分别为:时程5 ms,场强1.25～1.5 kV/cm;时程15 ms时,场强1.0～1.25 kV/cm;时程25 ms时,场强0.75～1.0 kV/cm.接着采用场强1.25 kV/cm,时程15 ms,研究转染的温度、电导介质、细胞状态、DNA用量和细胞密度对转染效率的影响,结果表明电导介质为Dhanks,DNA用量为4 μg/mL,对数期细胞密度为1×106～1×107个/mL,电击前后在4℃下各静置10 min时,能获得最佳转染效率.