3株鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体的制备及特性鉴定

摘要

鸭疫里默氏杆菌(RA)病,是家禽中主要的细菌性传染病之一,血清型复杂且各血清型间缺少交叉免疫保护,其中血清1型、2型、10型是国内优势血清型。外膜蛋白A(OmpA)是RA的毒力因子之一,在不同血清型RA中保守性良好。用OmpA蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,与骨髓瘤细胞SP2/0融合后用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,腹腔注射BALB/c小鼠制备单克隆抗体。通过间接ELISA检测单克隆抗体效价及稳定性,秋水仙素法进行染色体分析,Western blot和玻片凝集试验鉴定单克隆抗体特异性。获得3株稳定分泌抗RA OmpA的单克隆抗体,分别命名为2D5、2A6、4H8;3株单克隆抗体的亚型均为IgG2a,腹水效价均为1∶2048000,均与鸭疫里默氏杆菌血清1型RA-CH3、血清2型RA-NJ3、血清10型RA-HXb2发生特异性反应,而与其他禽源致病菌不发生交叉反应。本研究成功研制的3株单克隆抗体具有良好的菌种特异性,有助于RA致病机理和RA快速诊断试剂盒的研制。