副猪嗜血杆菌外膜蛋白PlpD基因的原核表达及免疫保护性分析

摘要

为研究副猪嗜血杆菌PlpD基因的免疫保护性,根据GenBank上已公布的PlpD基因序列设计该基因的特异性引物,以本实验室保存的副猪嗜血杆菌5型菌株为模板,PCR扩增目的片段,构建重组质粒pET28-PlpD,并将其转至表达茵BL21 (DE3)中进行诱导表达.SDS-PAGE电泳检测显示,在温度为16℃时使用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导12h,目的蛋白可溶性表达量最高,Western blot结果表明该目的蛋白具有较好的反应原性.将获得的融合蛋白PlpD进行纯化后制备成亚单位疫苗,经腹腔注射免疫小鼠,3免后用高于副猪嗜血杆菌的致死剂量1.5×109CFU进行攻毒,结果显示PlpD基因对小鼠具有一定的免疫保护性.