活化蛋白激酶C受体1影响柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的初步研究

摘要

在前期实验中,本实验室利用iTRAQ技术研究了柔嫩艾美耳球虫子孢子感染宿主细胞后蛋白质组学的变化,获得了一批与子孢子入侵相关的宿主蛋白.本研究以鸡肌肉的cDNA为模板,对其中活化蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1,RACK1)进行克隆、表达及纯化,结果显示,成功获得RACK1-GST融合蛋白,并作为免疫原制备兔抗RACK1-GST多克隆抗体;利用RT-qPCR和Western blot检测子孢子感染DF-1细胞过程中RACK1的mRNA转录水平和蛋白表达水平.结果显示,子孢子感染细胞24～72 h时,细胞RACK1的转录水平和蛋白表达水平均明显提高;利用抗体抑制入侵试验检测RACK1多抗对子孢子入侵细胞的影响,结果显示,100μg/mL和200μg/mL RACK1-GST抗体作用细胞后对子孢子的入侵影响不大,而300μg/mL和400μg/mL作用细胞后能明显促进子孢子的入侵.以上结果表明,宿主RACK1对球虫子孢子入侵细胞起负调控的作用,但具体机制尚需深入研究.