羊种布鲁菌lpsA基因缺失株的构建及生物学特性研究

摘要

为构建羊种布鲁菌lpsA基因缺失株并分析其对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的损伤作用及引起炎症反应的因子变化。以羊种布鲁菌M5-90株为模板,同源重组和抗性替换法构建自杀载体,电穿孔法转入M5-90感受态细胞构建lpsA基因缺失株M5-90ΔlpsA,将lpsA基因亚克隆至pBBR1MCS4载体电转至M5-90ΔlpsA感受态细胞构建回补株M5-90ΔlpsA-C,对缺失株及回补株的体外生长、胞内生存、粘附力等生长特性和感染HPT-8产生的细胞毒性及细胞因子变化进行分析。结果显示,成功构建缺失株和回补株,体外生长趋势与亲本株相比,缺失株M5-90ΔlpsA粘附力较低且对环境的应激能力降低;在侵染HPT-8细胞12 h后缺失株生存率显著低于亲本株,细胞毒性降低,且诱导的细胞因子IL-1β和IL-18均比亲本株高,差异显著;回补株M5-90ΔlpsA-C恢复了这些表型变化。本研究表明lpsA基因在羊种布鲁菌M5-90株的致病能力中发挥了重要作用,为进一步揭示布鲁菌生物特性及感染宿主细胞分子机制奠定基础。