猪流行性腹泻病毒重组S2蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

摘要

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达纯化的PEDV S2重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种PEDV重组S2蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,重组蛋白抗原最佳包被量0.8μg/孔;血清最佳稀释倍数为1∶40,最佳血清孵育时间为120 min;酶标二抗最佳工作浓度为1∶4000,最佳二抗反应时间为45 min;最佳底物显色时间为15 min;待检血清样品S/P值>0.212时判定为阳性,待检血清样品S/P值<0.188时判定为阴性,当0.188≤待检血清样品S/P值≤0.212时判定为可疑。以S2蛋白作为包被抗原建立的PEDV抗体间接ELISA方法仅对PEDV血清检测为阳性,与猪瘟病毒、猪丁型冠状病毒等主要猪源病毒阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。该方法检测灵敏度较高、重复性好,批内和批间重复性变异系数均小于10%。利用本研究建立的PEDV S2蛋白间接ELISA抗体检测方法对广西地区不同阶段猪群血清样品共计622份进行检测,总体样品阳性率为76.05%,不同阶段阳性率相差较大。本实验建立的ELISA方法可应用于临床样品PEDV抗体检测以及PEDV血清流行病学调查。