重组腺病毒气管途径反复转染大鼠肺组织人类eNOS基因的转导效果

摘要

目的重组腺病毒气管途径反复转染大鼠肺组织人类内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因的转导效果。方法雄性Wistar大鼠60只,3～4月龄,体重220～280 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组:对照组（C组,n=10）和重组eNOS基因转染组（T组,n=50）。麻醉下,气管插管,行机械通气,T组气管内注射滴度为5×10~9 PFU/ml的携带人类eNOS基因的重组腺病毒载体质粒DNA 50μl,C组注射等容量病毒保存液,每隔5 min重复经气管内注射一次,共注射12次。T组分别于转染后2、5、7、14、21 d时取10只大鼠,采集肺动脉血样,采用硝酸还原酶法测定血清NO浓度,分别采用Westernblot法及荧光定量PCR技术检测肺组织eNOS其及RNA表达,采用免疫组化法测定气管、支气管、肺、肝、脾、肾组织eNOS表达。结果与C组比较,T组各时点肺动脉血清NO浓度、肺组织eNOS及其RNA表达升高（P＜0.05）;转染后7、14和21 d时明显高于转染后2 d（P＜0.05）。T组气管、支气管上皮细胞、肺泡囊内细胞和肺内小血管的内皮细胞均有eNOS表达,而C组未见eNOS表达。转染后7 d时肝、脾、肾组织未见eNOS表达。结论重组腺病毒气管途径反复转染大鼠肺组织人类eNOS基因后,可实现外源基因在肺内表达,且具有正常的酶活性,无远隔器官表达。