阿片受体、PI3K/Akt和ERK信号通路在瑞芬太尼预处理减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

摘要

目的评价阿片受体、磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（P13K/Akt）和细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在瑞芬太尼预处理（RPC）减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤中的作用。方法健康成年雄性SD大鼠,处死后取心室肌组织,原代培养心肌细胞,调整细胞浓度为2×10~4个/ml后接种于24孔细胞培养板（500μl/孔）中,采用随机数字表法,将其中108个培养孔分为12组（n=9）:正常对照组（C组）;H/R损伤组（H/R组）采用缺氧90 min/复氧120 min的方法制备心肌细胞H/R损伤模型;缺氧预处理组（HPC组）在H/R前,培养孔经缺氧10 min/复氧30 min;瑞芬太尼预处理组（RPC组）在H/R前,以终浓度1μmol/L.瑞芬太尼孵育心肌细胞10 min,再常规培养30 min;δ受体拮抗剂纳曲吲哚+RPC组（NTD+RPC组）、κ受体拮抗剂nor-binahorphimine（nor-BNI）+RPC组（BNI+RPC组）、PI3K/Akt信号通路阻断剂渥曼青霉素+RPC组（W+RPC组）、ERK信号通路阻断剂PD98059+RPC组（PD+RPC组）在RPC前10 min分别维持培养孔终浓度5μmol/L纳曲吲哚和norBNI、0.1μmol/L渥曼青霉素和30μmol/L PD98059,然后与瑞芬太尼共孵育10 min,再常规培养30 min,随后行H/R;试剂对照组分别为NTD组、BNI组、W组和PD组。于复氧结束时,测定心肌细胞活力、细胞凋亡率和培养液乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果与C组比较,H/R组心肌细胞活力降低,细胞凋亡率和培养液LDH活性升高（P＜0.05）;与H/R组比较,HPC组、RPC组和BNI+RPC组心肌细胞活力升高,细胞凋亡率和培养液LDH活性降低（P＜0.05）,NTD+RPC组、W+RPC组、PD+RPC组、NTD组、BNI组、W组和PD组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与RPC组比较,NTD+RPC组、BNI+RPC组、W+RPC组和PD+RPC组心肌细胞活力降低,细胞凋亡率和培养液LDH活性升高（P＜0.05）。结论瑞莽太尼预处理可能通过激活δ受体,进而激活PI3K/Akt和ERK信号通路,从而减轻大鼠心肌细胞H/R损伤。