外源性硫化氢对内毒素血症大鼠肺组织线粒体途径细胞凋亡的影响

摘要

目的评价外源性硫化氢对内毒素血症大鼠肺组织线粒体途径细胞凋亡的影响。方法健康雄性SD大鼠40只,2~3月龄,体重250~310g,采用随机数字表法分为5组（n=8）:对照组（C组）、LPS组、低剂量硫氢化钠（NaHS）组（L-NaHS组）、中剂量NaHS组（M-NaHS组）和高剂量NaHS组（H-NaHS组）。采用静脉注射LPS 5mg/kg的方法制备内毒素血症模型。C组静脉注射等容量0.9%氯化钠溶液。L-NaHS组、M-NaHS组和H-NaHS组分别于静脉注射LPS后3 h时腹腔注射硫化氢供体NaHS 0.78、1.56和3.12 mg/kg。于静脉注射LPS或0.9%氯化钠溶液后6 h时处死大鼠,取肺组织,观察肺组织线粒体超微结构,采用流式细胞术检测肺细胞凋亡率,分别采用Western blot法和RT-PCR法检测肺组织caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax及其mRNA的表达水平,计算Bcl-2和Bax表达水平的比值（Bcl-2/Bax比值）,采用Western blot法检测肺组织胞浆及线粒体细胞色素c（Cyt c）的表达水平。结果与C组比较,LPS组细胞凋亡率升高,肺组织caspase-3、caspase-9、Bax和Bcl-2及其mRNA表达上调,Bcl-2/Bax比值降低,胞浆Cyt C表达上调,线粒体Cyt c表达下调（P＜0.05或0.01）;与LPS组比较,L-NaHS组、M-NaHS组和H-NaHS组细胞凋亡率降低,肺组织caspase-3、Bax及其mRNA表达下调,Bcl-2及其mRNA表达上调,Bcl-2/Bax比值升高,胞浆Cyt c表达下调,线粒体Cyt c表达上调,M-NaHS组和H-NaHS组caspase-9及其mRNA表达下调,L-NaHS组caspase-9表达下调（P＜0.05或0.01）,caspase-9 mRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）,M-NaHS组和H-NaHS组线粒体超微结构损伤程度减轻。结论外源性硫化氢抑制内毒素血症大鼠肺组织细胞凋亡的机制可能与抑制线粒体凋亡途径有关。