程序性坏死在大鼠肠缺血再灌注致肝损伤中的作用

摘要

目的评价程序性坏死在大鼠肠缺血再灌注致肝损伤中的作用。方法健康成年雄性SD大鼠32只,体重250~300 g,采用随机数字表法分为4组（n=8）:假手术组（S组）、肠缺血再灌注组（I/R组）、程序性坏死特异性抑制剂necrostatin-1组（N组）和二甲基亚砜组（D组）。采用阻断肠系膜上动脉1.5 h再灌注6 h的方法制备大鼠肠缺血再灌注损伤模型。S组仅分离肠系膜上动脉,不夹闭;于缺血前30 min时N组腹腔注射necrostatin-1 1 mg/kg（用二甲基亚砜稀释至200μl）,D组腹腔注射等容量二甲基亚砜。再灌注6 h时取肝组织,HE染色后光镜下观察病理学结果,并采用Eckhoff评分法评估肝损伤程度。心尖穿刺取血,采用ELISA法测定血清ALT浓度。采用Western blot法测定肝细胞受体相互作用蛋白1（RIP1）、RIP3和肝细胞胞浆高迁移率族蛋白1（HMGB1）的表达水平。采用免疫组化法检测肝组织RIP1和R1P3的定位情况,免疫荧光法检测肝细胞HMGB1核外转移情况。结果与S组比较,I/R组肝组织Eckhoff评分和血清ALT浓度升高,肝组织RIP1、RIP3和HMGB1表达上调（P＜0.05）,汇管区高表达RIP1和RIP3的肝细胞增多;与I/R组比较,N组肝组织Eckhoff评分和血清ALT浓度降低,肝组织RIP1、RIP3和HMGB1表达下调（P＜0.05）,汇管区高表达RIP1和RIP3的肝细胞减少,D组与I/R组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）。S组汇管区周围肝细胞HMGB1位于细胞核内;I/R组和D组汇管区大量肝细胞内HMGB1转移至胞浆内;N组汇管区少量肝细胞HMGB1转移至胞浆内。结论程序性坏死参与了大鼠肠缺血再灌注致肝损伤的过程。