BMP2介导长链非编码RNA调控牙齿细胞命运

摘要

骨形成蛋白2(BMP2)是一种重要的生长因子,在牙齿发育和细胞分化过程中起重要作用。人类和小鼠BMP2基因突变与牙齿发育缺陷呈相关性。长链非编码RNA(IncRNA)是一类长度大于200bp无蛋白编码功能的RNA。大量研究表明IncRNA涉及多种生物过程的调控。本研究旨在探讨BMP2介导IncRNA调控牙乳头间充质细胞谱系演变及牙齿发育的机制。利用构建的Bmp2 floxed/floxed和Bmp2 KO/KO牙乳头间充质细胞株(DMCs),通过RNA测序筛选2种细胞间差异表达的IncRNA并以qRT-PCR证实;快速cDNA末端扩增法鉴定IncRNA的全长序列;原位杂交检测IncRNA的胞内分布;RIP结合质谱分析鉴定RNA-蛋白质间的相互作用;将IncRNA的启动子片段克隆至荧光素酶报告基因载体pN2.1,分析BMP2对其启动子活性的影响;构建靶向IncRNA的pLKO-shRNA载体,转染至DMCs以敲减IncRNA的表达。