神经组织的双重免疫组化染色法

摘要

在研究心传导系统神经组织的正常分布、增龄变化及其病变与猝死的关系的过程中,我们建立了一套能同时显示神经轴突和雪旺氏细胞的双重免疫组化染色方法.1 材料与方法1.1 主要试剂 一抗:鼠单克隆PGP9.5抗血清,英国Ultraclone公司;兔多克隆S100抗血清,丹麦Dakopatts公司.桥联试剂:羊抗鼠IgG/碱性磷酸酶与羊抗兔IgG/辣根过氧化酶,丹麦Dakopatts公司.底物:萘酚AS-MX磷酸与固蓝B:美国Sigma公司;二氨基联苯胺(DAB):美国Sigma公司.1.2 标本 人尸检心脏与传导系统组织10例,均为常规福尔马林固定、石蜡包埋的标本,切片厚度5μm,裱于Superfrost plus(英国BDH)玻片上.1.3 免疫组化染色方法(1)高压消毒蒸锅暴露抗原:切片经脱蜡、抑制内源性过氧化酶后,浸入1mmol/L的EDTA缓冲液(PH8.0),置入高压消毒蒸锅处理(120℃,105kPa)10min,冷却后移入0.01mmol/L的PBS(pH7.1,下同)平衡10min,进行下面的免疫组化染色.(2)双重免疫组化染色步骤:①滴加一抗混合物:PGF9.5(1:4000)+S100(1:12000),4℃,16～18h.