微流控芯片-激光诱导荧光快速检测4种食源性致病菌

摘要

建立了食品中4种常见食源性致病菌的微流控芯片快速检测方法.根据副溶血弧菌的Vpara(16S-23s rDNA IGs)基因、沙门菌的 invA 基因、大肠杆菌 0157:H7 的 rfb0157 基因和志贺菌的 ipaH 基因序列设计了4对特异性引物,对上述致病菌进行四重 PCR 扩增,采用微流控芯片-激光诱导荧光检测食品中4种常见致病菌的多重 PCR 扩增产物.优化了多重 PCR 扩增和微流控芯片电泳分离的实验条件.当芯片电泳的筛分介质 HPMC-50 浓度为2.2%、溴乙锭(EB)含量为3.75μmoL/L、电场强度为120 V/cm 时,pUC Mix DNA Marker-8和待测致病菌的多重PCR扩增产物可以实现基线分离,600 s内即可完成上述4种致病菌的同时检测,迁移时间的日内相对标准偏差为0.74%～2.09%.本方法能够检出1×102 cfu/mL的副溶血弧菌、沙门菌、大肠杆菌0157:H7和志贺菌.方法特异性高,所设计的引物在10种非目的菌株体系中均未见扩增的片段.将本法应用于食品中上述致病菌的测定,获得了满意的结果,为常见食源性致病菌的快速检测提供了一种新的可靠分析手段,对保障食品安全具有重要的现实意义.