鲮生长激素cDNA的克隆及其重组表达产物的促生长活性

摘要

利用RT-PCR技术从鲮脑垂体组织中克隆出生长激素cDNA 片段,克隆的mcGH全长567bp,编码由188个氨基酸残基组成的GH成熟肽.构建了表达载体pQE30-mcGH,转化大肠杆菌M15(pREP4),在初步优化发酵条件的基础上实现了鲮mcGH在大肠杆菌中的高效表达,表达的重组蛋白占菌体总蛋白的32.13%,经western blotting分析证实所表达的重组蛋白是mcGH.表达产物主要以包涵体的形式存在.重组蛋白变性、复性后,经Ni-chelating Sepharose亲和层析纯化,SDS-PAGE显示,纯化的mcGH纯度约为94%.纯化的mcGH腹腔注射莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus),经4周处理后,实验组1和2的体长增长率分别比对照组快9.38%和9.75%,体重增长率分别快23.42%和62.48%.经t检验统计分析表明,表达的重组mcGH具有显著的促罗非鱼生长作用(P＜0.05).