鲮生长机制的研究——饲料蛋白水平对鲮消化酶活性、生长因子表达的影响及其生长激素多克隆抗体的制备

摘要

本文以鲮鱼(Cirrhinus molitorella)为研究对象，以秘鲁鱼粉为饲料蛋白源分别配制饲料蛋白含量为21.5％，32.2％，42.5％和51.6％的营养饲料，研究饲料蛋白水平对鲮生长、消化酶活性、GH及IGF-1 mRNA组织表达的影响，探讨在不同饲料蛋白水平下鲮生长速度与鲮消化酶活性、GH及IGF-1 mRNA表达水平之间的关系，尝试建立评价饲料质量的新方法。同时，也做了鲮生长激素的重组表达其多克隆抗体的制备。 1.研究探讨了不同饲料蛋白水平与鲮生长速度之间的关系。实验以秘鲁鱼粉为饲料蛋白源，研究4种蛋白水平(分别为21.5％，32.2％，42.5％，51.6％)的饲料对鲮(Cirrhinus molitorella)生长的影响，经过8周的养殖实验，投喂饲料蛋白水平为51.6％的实验组鲮特定生长率最高，与21.5％组，32.2％组和42.5％组之间差异极显著(P<0.01)，42.5％组与21.5％组差异显著(P<0.05)。 2.研究探讨了不同蛋白水平与鲮消化酶活性之间的关系。随着饲料蛋白水平的增高，肠和肝胰腺的蛋白酶比活性有所增加，其中51.6％组与21.5％组差异极显著(P<0.01)，42.5％组与21.5％组差异显著(P<0.05)；肠和肝胰腺的淀粉酶比活性随饲料蛋白水平的增加略有下降，51.6％组与21.5％和32.2％组有显著差异(P<0.05)；脂肪酶比活性随饲料蛋白水平的增加也有所下降，21.5％组与32.2％组，42.5％组和51.6％差异极显著(P<0.01)，其它组间差异不显著(P>0.05)。鲮特定生长率与蛋白酶活性具有极显著正相关性(P<0.01)；鲮肠淀粉酶活性与特定生长率有显著负相关性(P<0.1)，但肝淀粉酶活性与特定生长率无相关性(P<0.1)：肠脂肪酶活性与特定生长率没有相关性(P<0.1)，但肝脂肪酶活性与特定生长率呈负相关(P<0.1)。在实验的前4周鲮的消化酶比活性均有所增加，第四周后增加到最大值，此后略有下降，但也基本稳定在一个相对较高的水平，表明鲮消化酶活性对饲料中蛋白含量有适应性反应。 3.随着饲料蛋白水平的增高，鲮脑组织GH mRNA的表达量以及鲮肝组织IGF-I mRNA的表达量有所增加。从整个养殖周期来看，鲮脑组织GH mRNA的表达量以及鲮肝组织IGF-I mRNA的表达量随着蛋白水平的提高而提高，从第一周到第四周基本上增加到最大值，后略有下降后又略有上升，也基本保持一个相对较高的水平。鲮肝组织IGF-I mRNA的表达量与特定生长率均具有极显著的正相关性(P<0.01)；鲮肝组织IGF-I mRNA的表达量与蛋白酶活性也均具有极显著的正相关性(P<0.01)；鲮肝组织IGF-I mRNA的表达量与脂肪酶活性无相关性(P<0.01)；鲮肝组织IGF-I mRNA的表达量与肠淀粉酶活性有负相关性(P<0.01)，鲮肝组织IGF-I mRNA的表达量与肝淀粉酶活性无相关性(P<0.01)。综上可知，不同饲料蛋白水平下，蛋白酶活性与特定生长率成极显著的正相关性(P<0.01)；鲮肝组织IGF-I mRNA的表达量与特定生长率成极显著正相关性(P<0.01)；鲮肝组织IGF-I mRNA的表达量与蛋白酶活性也成极显著正相关性(P<0.01)。由此推断：我们可以通过检测养殖对象的肝组织IGF-I mRNA的表达量来快速鉴定饲料的质量。 4.IPTG诱导含有鲮生长激素基因(Growth hormone，GH)的工程菌M15(pQE30-GH)，重组表达鲮生长激素蛋白，SDS-PAGE凝胶电泳结果表明在24.5kDa处有一条重组表达鲮生长激素条带，所表达的鲮生长激素蛋白主要以包涵体形式存在，分离纯化该包涵体，并经复性和浓缩后得到有活性的重组鲮生长激素。以复性浓缩后的重组鲮生长激素蛋白为抗原，采用改进的方法对新西兰大白兔进行皮下多点免疫注射，获得鲮生长激素多克隆抗血清。经ELISA检测该免疫血清的滴度为12800，以该多抗为一抗，Western blotting可以检测到10ng的抗原量；并且在鲮垂体组织提取液中和血清中检测到一种能与该血清作用的大小约为21.5kDa的蛋白条带，说明本实验所制备的兔抗鲮生长激素多克隆抗体具有较好的免疫活性。该方法的建立，为深入研究鲮生长机制提供了新的手段。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第1章文献综述 鱼类GH/IGF-1轴以及消化酶活性的研究进展

1.GH/IGF-I轴概述

2.鱼类中GH/IGF-I轴影响因素

3消化酶活性研究概述

4.GH-IGF-1轴对消化系统的影响

5营养水平与生长的关系

6展望

第二章本研究的背景、目的意义、内容和技术方案

1.研究背景

2.本研究的目的意义

3.本研究的内容

4.本研究的技术路线

第三章饲料蛋白水平对鲮生长的影响

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

第四章饲料蛋白水平对鲮消化酶活性的影响

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

第五章饲料蛋白水平对鲮GH和IGF-1 MRNA组织表达的影响

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

第六章鲮生长激素的重组表达及其多克隆抗体的制备

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

小结

参考文献

附录

致谢