幽门螺旋杆菌尿素酶纳米抗体UreNb重组质粒的构建及其产物的表达、纯化与鉴定

摘要

目的构建幽门螺旋杆菌尿素酶纳米抗体UreNb重组质粒,在大肠杆菌系统中通过诱导表达目的蛋白并予以纯化,再对表达产物及纯化产物进行鉴定。方法利用DNA重组技术,先后使用两种原核表达载体pET22b和pSumo-mut表达目的蛋白UreNb,构建幽门螺旋杆菌尿素酶纳米抗体UreNb,重组质粒。将构建成功的纳米抗体UreNb重组质粒分别转化至大肠杆菌BL-21、ArcticExpress、Rosetta菌株中,采用不同温度经IPTG诱导表达目的蛋白。将成功表达的重组蛋白扩大培养,通过SDS-PACE法分析其表达蛋白,表达蛋白在沉淀物中即确定为包涵体蛋白。将包涵体蛋白变、复性后,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白并用WesternBlot法鉴定。结果果纳米抗体UreNb目的序列成功插入质粒中,在大肠杆菌表达系统BL-21中以包涵体形式表达(经SDS-PACE法验证)。经过包涵体复性后纯化,获得大量高纯度目的蛋白pSumo-mut-UreNb,纯化蛋白的分子量约为27kDa(经WesternBlot鉴定)。结论使用pSumo-mut质粒构建的幽门螺旋杆菌尿素酶纳米抗体UreNb能够在原核系统中得到高效表达,通过纯化获得具有活性的纯化蛋白。经鉴定,其大小与理论大小基本相符,可用于后续研究。