微小RNA-294靶向抑制髓系细胞触发受体-1对脓毒症炎症因子的影响

摘要

目的 探讨微小RNA-294（miR-294）靶向抑制髓系细胞触发受体-1（TREM-1）对脓毒症肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的影响.方法 利用生物信息学预测miR-294可能靶向调控TREM-1基因.体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,分成非炎症期和炎症期,每期各分为细胞对照组（NC组）、NC拟似物（mimic）和抑制剂（inhibitor）转染组（NCm组、NCi组）、miR-294 mimic和inhibitor转染组（miR-294m组、miR-294i组）5组.用双荧光素酶报告基因系统进行功能验证.以TurboFectTM小干扰RNA转染细胞48 h（非炎症期）后,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞TREM-1 mRNA表达;以1 mg/L内毒素处理6h后（炎症期）收集上清液,用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TNF-α、IL-6、HMGB1浓度;用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测TREM-1蛋白表达.结果 ①双荧光素酶报告基因系统证实TREM-1是miR-294的靶点.②非炎症期：miR-294m组TREM-1 mRNA表达（2-△△Ct）较NC组、NCm组明显降低（0.673±0.049比1.000±0.003、0.915±0.039,f1=2.184、t2=5.421,均P＜0.001）;miR-294m组TREM-1蛋白表达（灰度值）为NCm组的（50.00±1.19）％（t=41.586,P＜0.001）.③炎症期：miR-294m组TNF-α（ng/L）较NC组明显降低（1 547.18±47.18比2 702.11±327.20,t＝4.212,P=0.010）,IL-6（ng/L）较NC组、NCm组明显降低（505.28±33.33比837.66±69.43、918.72±119.39,t1=4.382、P1=0.015,t2=5.451、P2=0.021）;TREM-1蛋白表达（灰度值）为NCm组的（51.33±0.88）％（t=63.368,P＜0.001）;各组HMGB1比较均无差异.结论 miR-294能靶向抑制TREM-1表达,减少内毒素诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7分泌TNF-α和IL-6.