miR-370调控MGMT增强替莫唑胺对胶质瘤细胞化疗敏感性的实验研究

摘要

目的 探讨microRNA-370(miR-370)通过调控O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)增强替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤化疗敏感性的机制研究.方法 采用TMZ浓度梯度递增法体外建立U87/TMZR耐药细胞株,分别转染阴性空质粒和miR-370 mimics作为miR-NC组和miR-370 mimics组,另将未经处理的U87/TMZR细胞作为对照组.采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测miR-370和MGMT表达.TargetScan在线预测和双荧光素酶报告实验分析miR-370靶基因.采用MTT法和克隆形成实验检测各组细胞对替莫唑胺的敏感性.结果 体外成功建立U87/TMZR耐药细胞株,U87/TMZR细胞miR-370表达量较U87细胞降低(0.52±0.08 vs.1.00±0.05,P<0.05);miR-370 mimics组miR-370表达量为5.65±0.77,高于对照组和miR-NC组(P<0.05);而miR-370 mimics组细胞MGMT蛋白表达量低于对照组(0.28±0.03 vs.0.63±0.05,P<0.05).经TargetScan在线预测和双荧光素酶报告实验结果显示,MGMT是miR-370的靶基因.经不同浓度TMZ作用后,miR-370 mimics组U87/TMZR细胞IC50为(72.73±5.19)μmol/L,克隆形成数为179±35,均低于对照组和miR-NC组(P<0.05).结论 TMZ耐药肿瘤细胞中MGMT表达量增加,同时miR-370表达量降低.上调miR-370表达可通过抑制MGMT转录提高U87/TMZR耐药细胞对TMZ的敏感性.