miR⁃590靶向SIP1抑制胆管癌细胞上皮间充质转化的实验研究

摘要

目的 探讨miR?590在胆管癌细胞上皮间充质转化( EMT)中的作用及可能机制.方法 采用荧光定量PCR(QPCR)检测人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC以及人胆管癌细胞系HUCCT1、HCCC?9810、RBE中miR?590的表达情况.双荧光素酶报告试验评价miR?590对SIP1的靶向调控作用.向HUCCT1细胞转染miR?590 mimics(转染组)和无义核苷酸序列(NC组),Western blotting检测两组EMT相关蛋白的表达.向HUCCT1细胞转染SIP1 siRNA,Western blotting检测干扰SIP1后EMT相关蛋白的表达.结果 HUCCT1、HCCC?9810、RBE细胞系中miR?590水平分别为0. 37±0. 084、0. 31±0. 071和0. 53±0. 089,显著低于人正常肝内胆管上皮细胞系HIBEC的1. 12±0. 201,差异具有统计学意义(P＜0. 05). miR?590可抑制野生型SIP1 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型SIP1 3’UTR?MUT的荧光素酶活性无影响.转染miR?590 mimics可以下调HUCCT1细胞中Vimentin、N?cadherin、ZEB1、ETS1、SNAIL1及TWIST1蛋白表达,上调E?cadherin蛋白表达.SIP1沉默能上调上皮标志物E?cadherin蛋白表达,并下调间充质蛋白Vimentin和N?cadherin蛋白表达.结论 miR?590通过靶向SIP13’?UTR阻断其翻译,最终抑制胆管癌细胞上皮间充质转化.