下调RRM1基因增强胃癌AGS细胞对奥沙利铂敏感性的实验研究

摘要

目的 探讨下调RRM1基因对人胃癌AGS细胞奥沙利铂敏感性的影响.方法 人工构建RRM1siRNA1、RRM1 siRNA2、RRM1 siRNA3 3条特异性干扰片段转染至胃癌AGS细胞,同时设空白对照组和阴性对照组(非特异性干扰片段siRNA);实时荧光定量PCR及蛋白印迹法检测转染后胃癌AGS细胞RRM1 mRNA及蛋白表达,并筛选出转染效果最佳的干扰片段;CCK-8检测不同浓度奥沙利铂处理后各组胃癌细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测奥沙利铂处理后各组胃癌细胞的凋亡率.结果 RRM1 siRNA1、RRM1 siRNA2、RRM1 siRNA3 3组胃癌AGS细胞RRM1 mRNA表达水平较空白对照组分别下调28％、40％和82％.干扰效果最佳的RRM1 siRNA3组AGS细胞RRM1蛋白相对表达量为0.135±0.017,明显低于空白对照组及阴性对照组的0.641±0.003、0.636±0.056(P＜0.05),故选择siRNA3干扰片段用于后续实验.不同浓度奥沙利铂作用于各组AGS细胞24 h,RRM1 siRNA3组的细胞增殖抑制率均显著低于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05),3组胃癌AGS细胞的IC50分别为3.34、5.85和5.13μmol/L.经3μmol/L奥沙利铂处理上述3组细胞24h后,RRM1siRNA3组的凋亡率为(35.84±2.0)％,显著高于空白对照组和阴性对照组的(27.32±2.6)％和(28.26±1.5)％,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 下调RRM1基因可增加胃癌细胞对奥沙利铂敏感性,为预测胃癌以奥沙利铂为基础的化疗方案的疗效及制订个体化治疗方案提供了一定的理论依据.