Ⅱ型人多巴胺受体逆转录病毒载体的构建及表达

摘要

目的构建人全长耽R基因真核表达载体，研究D2R在帕金森病（PD）中的作用和机制。方法将D，ReDNA片段克隆于pLNCX2逆转录病毒载体，转染成纤维包装细胞系PT67，G418筛选单克隆后进行传代培养，通过原位杂交、免疫组织化学和Western blot检测其表达效果。病毒上清再感染骨髓基质细胞（MSCs），免疫荧光检测D2R基因表达率。结果成功构建了逆转录病毒表达载体pLNCX2-D2R，原位杂交证实D2R基因在PT-67表达的阳性率为80％以上，免疫组织化学检测可见其蛋白分布在胞浆和胞膜，细胞裂解后Western blot蛋白电泳可检测到约48．84kD的蛋白。经转染D2R基因的PT67细胞能分泌病毒并感染MSCs。