祛痰清瘀方通过抑制ERK-LATS-YAP信号缓解糖尿病大鼠大血管并发症的临床研究

摘要

目的 研究由桃红四物汤及二陈汤化裁而成的祛痰清瘀方对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人原代主动脉内皮细胞(HAoEC)病理性活化及增殖的抑制能力和机制.方法 60只大鼠,高脂饲养结合链尿菌素(STZ)建立大鼠糖尿病大血管病变模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、祛痰清瘀方组(2.5 g/kg)、辛伐他汀组(20 mg/kg),各10只;比较四组大鼠血糖和血脂水平及主动脉脂质含量.以20 mg/L的ox-LDL刺激HAoEC建立活化增殖模型,分为对照组、ox-LDL组和ox-LDL+祛痰清瘀方组,各10只.比较四组大鼠内皮Yes相关蛋白(YAP)表达水平及丝裂原活化蛋白激酶1/2(Erk1/2)磷酸化水平;比较五组HAoEC增殖速率、细胞中LATS1/2和YAP磷酸化水平,细胞中YAP靶基因CTGF、CYR61和ANKRD1表达水平.结果 模型组大鼠空腹血糖(FG)为(21.31±3.93)mmol/L、甘油三酯(TG)为(3.62±1.37)mmol/L、总胆固醇(TC)为(7.51±2.17)mmol/L和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)为(5.07±1.46)mmol/L均显著高于对照组的(5.42±0.62)、(0.84±0.06)、(1.78±0.25)、(0.38±0.15)mmol/L,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的(0.36±0.14)mmol/L低于对照组的(0.81±0.22)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠血清TG水平显著高于祛痰清瘀方组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠血清TG、TC和LDL-C水平均显著高于辛伐他汀组,差异有统计学意义(P<0.05).模型组大鼠主动脉TG和TC含量均显著高于对照组、祛痰清瘀方组和辛伐他汀组,差异有统计学意义(P<0.01或<0.05).模型组大鼠主动脉中YAP的表达水平及ERK1/2的磷酸化水平均显著高于对照组、祛痰清瘀方组和辛伐他汀组,差异有统计学意义(P<0.01).ox-LDL组增殖速率均高于对照组、祛痰清瘀方组和辛伐他汀组,低于祛痰清瘀方+ERK过表达组,差异有统计学意义(P<0.01).ox-LDL组细胞中LATS1/2和YAP的磷酸化水平显著低于对照组、祛痰清瘀方组和辛伐他汀组,Erk1/2的磷酸化比例显著高于对照组、祛痰清瘀方组和辛伐他汀组,差异均有统计学意义(P<0.01);祛痰清瘀方+ERK过表达组LATS1/2和YAP的磷酸化水平低于祛痰清瘀方组,差异均有统计学意义(P<0.01);各组MST1/2磷酸化水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).ox-LDL组细胞中YAP靶基因CTGF、CYR61和ANKRD1表达水平显著高于对照组、祛痰清瘀方组和辛伐他汀组,差异均有统计学意义(P<0.01);祛痰清瘀方+ERK过表达组YAP靶基因CTGF、CYR61和ANKRD1的表达水平显著高于祛痰清瘀方组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 祛痰清瘀方通过干扰丝裂原信号转导蛋白Erk1/2,阻碍YAP活化,抑制内皮细胞病理性增殖介导的糖尿病大血管病变.