肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2/CD,pH2/UPRT的构建

摘要

目的 利用婴儿双歧杆菌对实体瘤低氧区的靶向效应,构建肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2/CD和pH2/UPRT.方法 用PCR的方法从质粒pGEX/CD和pGEX/UPRT中扩增出CD基因和UPRT基因,用内切酶BamH I和Sal I酶切CD基因,UPRT基因和质粒pH2,分别连接后重组于大肠杆菌中.用电转化的方法将重组质粒转入婴儿双歧杆菌中.通过双酶切和基因测序的方法检验质粒pH2/CD和pH2/UPRT的正确性,RT-PCR检测该系统的mRNA表达.在黑色素瘤B16-F10细胞上检测该系统的体外肿瘤细胞杀伤效果.结果 成功地将CD基因和UPRT基因转入了乳酸菌表达质粒pH2,在纯化后的质粒被双酶切后,CD基因被分割为6 9 kb和1 3 kb的两部分,UPRT基因被分割为6 9 kb和620 bp的两部分.CD基因和UPRT基因的测序结果表明序列与Genebank公布的序列一致.RT-PCR检测到CD和UPRT mRNA的明显表达.黑色素瘤细胞的低存活率证明pH2/CD,pH2/UPRT自杀基因治疗系统对黑色素瘤的强大杀伤作用.结论 肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统pH2/CD,pH2/UPRT构建成功并显示出强大的杀伤肿瘤细胞的作用.