液相色谱-质谱联用法测定人血浆中氯吡格雷及其3种代谢产物的浓度

摘要

cqvip:目的:建立同时测定人血浆中氯吡格雷(CLP)及其中间代谢产物2-氧-氯吡格雷(2-O-CLP)、非活性代谢产物氯吡格雷羧酸代谢物(CLPCA)和活性代谢产物氯吡格雷硫醇代谢物(CLPTM)浓度的方法。方法:选取陆军军医大学第一附属医院确诊为脑卒中的90名患者,早晨空腹口服1片氯吡格雷片(75 mg/片),于服药2 h后采集血样,将CLPTM经2-溴-3’-甲氧基苯乙酮衍生形成CLPTM-D后与其余3种待测物一起通过乙腈蛋白沉淀提取后,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定其浓度。色谱柱为Agilent poroshell 120 EC-C18,流动相为0.1%甲酸的乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液(90∶10,V/V),采用多反应监测模式进行正离子检测,检测离子对分别为CLPCA质荷比(m/z)308.1→198.1、CLP m/z 322.3→212.0、2-O-CLP m/z 338.3→155.0、CLPTM-D m/z504.4→354.1、内标噻氯吡啶m/z 264.0→154.1。结果:CLPCA、CLP、2-O-CLP、CLPTM-D和内标的保留时间分别为2.01、3.32、2.83、2.68、1.87 min,CLPCA、CLP、2-O-CLP、CLPTM-D检测质量浓度的线性范围分别为100~10000、0.2~20、0.3~30、0.5~50ng/mL(r均≥0.9995),日内、日间精密度试验的RSD均≤9.5%(n=5),准确度为93.5%~98.9%(n=5),提取回收率为85.4%~95.9%(n=5),基质效应的CV为2.7%~6.2%(n=5)。稳定性(-80℃放置3个月、3次冷冻-解冻循环、4℃放置8 h)试验中,CLPCA、CLP、2-O-CLP和CLPTM-D的RE均≤10.0%(n=5)。结论:建立的LC-MS/MS法特异性强,测定结果准确可靠,可用于检测人血浆中CLP及其3种代谢产物的浓度。