Exendin-4真核表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达

摘要

目的:构建Exendin-4基因真核表达裁体,并在巴斯德毕赤酵母GS115中进行表达,为大量获得Exendin-4奠定基础.方法:采用重叠聚合酶链反应法扩增出Exendin-4的完整序列,将其亚克隆到表达载体pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K-Exendin-4.重组质粒经Sac Ⅰ线性化后用电穿孔法导入到GS115中,经组氨酸缺陷筛选、G418高拷贝筛选及摇瓶表达筛选,甲醇诱导表达后用凝胶电泳法分析Exendin-4的表达.结果:序列测定结果表明成功地构建了毕赤酵母表达栽体,电泳结果证明Exendin-4在毕赤酵母中能高效表达.结论:实现了Exendin-4单体在毕赤酵母中的表达,为Exendin-4的规模化生产奠定了基础.