人肺癌转移相关蛋白1重组慢病毒载体的构建和病毒包装及其鉴定

摘要

目的构建人肺癌转移相关蛋白1（LCMR1）重组慢病毒载体，并包装慢病毒颗粒，为进一步研究该基因在人肺癌发生发展中的功能提供实验基础。方法将人肺癌转移相关基因LCMR1扩增后，酶切连接构建人pLVX—IRES—Neo病毒载体，转化DH5a大肠杆菌，挑取阳性克隆测序鉴定，将重组质粒与慢病毒系统一起转染Lenti—X293T病毒包装细胞，并将收集的病毒感染肺癌细胞系95C，即时定量聚合酶链反应（q—PCR）及蛋白质印迹法验证其表达情况。结果DNA测序结果证实成功构建人LCMR1重组慢病毒载体，包装后的病毒浓缩液浓度可达2．5×10^8IFU／ml以上。包装后的病毒颗粒感染95C细胞系，LCMR1的mRNA水平提高9．98倍（P〈0．05），蛋白水平的表达也明显增强。结论本研究成功构建了pLVX—IRES—LCMR1-Neo慢病毒载体，获得的慢病毒颗粒有效感染肺癌细胞系95C，为研究该基因在肺癌中的功能建立了模型。