脂滴包被蛋白基因反义RNA对人脂肪肉瘤细胞SW872增殖活性的影响

摘要

目的观察脂滴包被蛋白(perilipin)基因反义RNA对人脂肪肉瘤细胞SW872增殖能力的影响。方法将含perilipin基因反义cDNA序列的pcDNA3.1-perilipin(-)质粒及pcDNA3.1空载体质粒转染入人脂肪肉瘤SW872细胞,分别命名为SW872-A组和SW872-E组;未转染的瘤细胞为空白对照(SW872-wt组)。用逆转录聚合酶链反应法和链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物免疫组织化学方法检测perilipin反义基因及perilipin蛋白表达。用噻唑蓝还原法检测SW872细胞增殖活性;用流式细胞术检测细胞凋亡和增殖周期分布。将转基因SW872脂肪肉瘤细胞接种于balb/c裸鼠后肢皮下,4周后观察成瘤情况。结果 SW872-E组和SW872-wt组细胞perilipin mRNA表达明显高于SW872-A组;SW872-A组perilipin阳性细胞数较另2组明显减少。SW872-A组细胞在第1～6天增殖能力逐渐增加,与SW872-E组和SW872-wt组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。SW872-A组S期和G_2/M期细胞比例明显大于SW872-E组和SW872-wt组[(39±4)%比(19±5)%、(20±3)%,(40±4)%比(20±3)%、(21±3)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。SW872-A组裸鼠皮下移植瘤的成瘤时间明显短于SW872-E组和SW872-wt组[(5.3±2.6)d比(10.3±2.2)、(11.2±2.7)d];接种后28 d,SW872-A组瘤体重量明显大于SW872-E组和SW872-wt组[(3.87±0.46)g比(1.62±0.73)、(1.83±0.24)g],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 perilipin基因反义RNA可抑制SW872脂肪肉瘤细胞中脂滴包被蛋白的表达,促进裸鼠体内肿瘤生长。