二至丸合桂枝汤对三阴性乳腺癌细胞系顺铂耐药性的调控作用

摘要

目的 研究二至丸合桂枝汤对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系顺铂(CDDP)耐药性的影响.方法 选取TNBC细胞株MDA-MB-231,给予0.01、0.1、0.5、1、5、10 μmol/L的CDDP干预,制备CDDP耐药细胞株(MDA-MB-231/CDDP),用CCK-8检测不同浓度(0.01、0.1、0.5、1、5、10μmol/L)CDDP干预下MDA-MB-231与MDA-MB-231/CDDP的细胞活性,同时以未加入CDDP的样孔作为对照组.并用定量反转录PCR(qRT-PCR)、Western blot检测其血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA和蛋白表达情况,以验证制备的MDA-MB-231/CDDP.MDA-MB-231/CDDP细胞分为空白组(不做任何处理)、二至丸合桂枝汤组(200 μg/ml二至丸合桂枝汤)、CDDP组(10 μmol/L CDDP)、联合组(200 μg/ml二至丸合桂枝汤+10 μmol/L CDDP).CCK-8和流式细胞术检测各组细胞活力及凋亡.qRT-PCR、Western blot测定各组VEGF、HIF-1α的mRNA及蛋白表达.结果 MDA-MB-231和MDA-MB-231/CDDP细胞对CDDP的IC50值分别为1.6001 μmol/L和36.4320 μmol/L.CDDP浓度为10μmol/L的MDA-MB-231、MDA-MB-231/CDDP细胞中VEGF、HIF-1α mRNA表达水平均低于对照组,CDDP浓度为10μmol/L的MDA-MB-231/CDDP细胞中VEGFmRNA表达水平高于MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).CDDP浓度为10 μmol/L的MDA-MB-231细胞中HIF-1α、VEGF蛋白表达水平低于对照组,MDA-MB-231/CDDP细胞HIF-1α蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01),CDDP浓度为10μmol/L的MDA-MB-231/CDDP细胞中HIF-1α、VEGF蛋白表达水平高于MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).作用24h后,CDDP组和联合组细胞存活率均低于空白组,联合组细胞存活率低于CDDP组和二至丸合桂枝汤组,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜ 0.01).作用48 h后,联合组、CDDP组和二至丸合桂枝汤组细胞存活率均低于空白组,联合组细胞存活率低于CDDP组和二至丸合桂枝汤组,差异有高度统计学意义(P＜0.01).二至丸合桂枝汤组、CDDP组和联合组细胞凋亡率均高于空白组,差异有高度统计学意义(P＜0.01),联合组细胞凋亡率高于二至丸合桂枝汤组及CDDP组,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).CDDP组和联合组MDA-MB-231/CDDP细胞中HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白表达水平均低于空白组,联合组低于二至丸合桂枝汤组,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 二至丸合桂枝汤可通过调控HIF-1α信号通路,下调VEGF表达,逆转TNBC细胞系CDDP耐药性.