二至丸合桂枝汤对三阴性乳腺癌细胞系顺铂耐药性的调控作用

摘要

目的:探讨二至丸合桂枝汤对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系顺铂耐药性的影响及其分子机制作用.方法:设计并合成3条缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)siRNA,分为1#siRNA组、2#siRNA组、3#siRNA组、阴性对照组及Control组分别转染,Western blot筛选最适siRNA.同时利用药物连续诱导法筛选顺铂耐药性MDA-MB-231细胞株(MDA-MB-231/CDDP).制备含二至丸合桂枝汤血清,MDA-MB-231/CDDP细胞株随机分为A:空白组(转染siRNA阴性对照)、B:HIF-1αsiRNA组、C:HIF-1αsiRNA+二至丸合桂枝汤组(200μg/ml含药血清)、D:HIF-1αsiRNA+二至丸合桂枝汤(200μg/ml)+顺铂(10μmol/L)组,继续培养,检测细胞活性、细胞凋亡及细胞侵袭情况.同时利用qRT-PCR和Western blot分别检测各组细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、HIF-1αmRNA及蛋白表达情况.结果:3#siRNA组HIF-1α蛋白表达水平抑制最显著,选此siRNA用于后续研究.与A组相比,C组和D组在作用24h、48h后均可显著抑制MDA-MB-231/CDDP细胞活性(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),且能显著抑制细胞侵袭能力(P<0.05或P<0.01),其中,D组作用效果最显著.qRT-PCR和Western blot检测结果显示二至丸合桂枝汤与顺铂联合干预,可显著下调MDA-MB-231/CDDP细胞中VEGF、HIF-1ɑmRNA及蛋白表达.结论:二至丸合桂枝汤可通过抑制HIF-1α通路,下调VEGF表达,调控TNBC细胞系的顺铂耐药性.