三种不同腺病毒基因组提取方法对全基因组克隆构建的影响分析

摘要

目的 建立一种简单、快速、有效、纯度高的人腺病毒全基因组提取的方法.方法 用60 mm细胞培养皿培养A549或AD293细胞,接种培养人7型腺病毒(HAdV-7)CQ1198株,收集病毒感染的细胞,分别用Hirt's改良法、试剂盒A和试剂B提取HAdV-7-CQ 1198病毒株全基因组,提取的基因组进行限制性内切酶酶切实验、细菌内同源重组实验和转染细胞拯救病毒实验.结果 几种方法都成功获得高质量的腺病毒全基因组,可以用于PCR、测序、酶切、同源重组和转染实验;两种试剂盒方法较传统的Hirt's改良法更快,不需要特别步骤去除细胞基因组,可以在1h内完成基因组提取.其中,试剂盒A提取的病毒基因组量最多(20～50 μg),RNA含量最少,不需要另外加入核糖核酸酶(RNase),而Hirt's改良法需要在裂解液中或最终产物中加入RNase以去除细胞RNA成分.结论 试剂盒A和试剂盒B均可替代传统Hirt's提取方法用于快速提取高质量腺病毒基因组,提取的基因组能用于酶切分型、转染等实验操作.