不同浓度α辅肌动蛋白对体外环境下肌动蛋白聚合-解离平衡的影响

摘要

目的 构建肌动蛋白的体外聚合一解离反应体系,探讨α辅肌动蛋白浓度对该平衡体系的影响.方法 采用改良的Sobieszek-Bremel法和Katalin Pinter法.从人骨骼肌中分别提取α辅肌动蛋白和G肌动蛋白,构建G肌动蛋白/F肌动蛋白/交联态肌动蛋白的聚合一解离反应体系.施加不同浓度的α辅肌动蛋白,并采用SDS-PAGE电泳与荧光显影法检测反应缓冲液中三种肌动蛋白含量的变化.结果 本方法 可制备高纯度的α辅肌动蛋白与G肌动蛋白;当α辅肌动蛋白浓度处于0-0.40 g/L时,交联态肌动蛋白含量随着前者浓度升高而增多,而当前者浓度处于0.40-0.70g/L时,交联态肌动蛋白含量进入平台期;在该反应体系内,F肌动蛋白/G肌动蛋白浓度比值处于0.45-0.59区间.结论 在一定范围条件下.适当增加α辅肌动蛋白可以促进F肌动蛋白交联反应.但F肌动蛋白/G肌动蛋白比值基本维持不变.