芋螺毒素MⅦA与GST的融合表达及其镇痛活性的测定

摘要

目的 构建芋螺毒素MⅦA基因的融合表达质粒pGEX-2T/CTX MⅦA在大肠杆菌中表达,并对融合蛋白的镇痛活性进行测定.方法 根据芋螺毒素MⅦA的氨基酸序列,按大肠杆菌偏爱密码子化学合成CTX MⅦA基因.把合成的CTX MⅦA基因克隆到谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX-2T中,构建质粒pGEX-2T/CTX MⅦA.将此质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后获得融合蛋白GST-CTX MⅦA,用谷胱甘肽偶联的Sepharose 4B柱对融合蛋白进行纯化.热板法测定其对小鼠的镇痛活性.结果 获得的融合蛋白GST-CTX MⅦA使小鼠疼痛阈值有显著提高.结论 基因工程产生的GST-CTX MⅦA融合蛋白具有明显的镇痛活性,且镇痛活性具有浓度依赖性,可以为进一步的科研及临床应用开辟新的途径.