单纯疱疹病毒胸苷激酶与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建

摘要

目的 建立既有TK活性又表达绿色荧光的融合蛋白治疗系统用于实验研究,为建立荧光活体成像技术,更为科学地进行肿瘤自杀基因增效中药成分的研究打下基础.方法 DNA重组技术构建HSV1-TK cDNA与EGFP基因融合的真核细胞表达裁体pTKGFP,用酶切鉴定并进行序列测定;polyFect转染液对鼠黑色素瘤细胞B16进行转染,荧光显微镜观察基因表达情况,MTT法检测转化细胞B16对GCV的敏感性.结果 重组质粒pTKGFP经限制性酶切鉴定和DNA序列测定分析显示,TK基因已经成功与GFP基因连接.连接处无移码突变产生;荧光显微镜下观察显示,TK-GFP融合基因在B16中获得表达.其在细胞中的定位与文献资料一致,TKGFP主要集中于胞核区而GFP弥散分布于胞质中.TKGFP组细胞对GCV的敏感性大于对照组细胞,差异有显著性.结论 构建了pTKGFP融合蛋白基因表达裁体,并成功在B16中进行表达,所表达的融合蛋白具有TK活性和GFP的荧光活性,可用于后续性的体外与体内实验.