应用RNA干扰抑制目的基因在小鼠体内表达

摘要

目的 研究RNA干扰(RNAi)对体外和体内基因表达的沉默作用.方法 以PCR方法 从基因组DNA中克隆出依赖于RNA聚合酶Ⅲ的H1启动子,并用于驱动RNAi片段的合成;构建特异性针对目的 基因(绿色荧光蛋白,GFP)的RNAi载体(Pi).将RNAi干扰载体和GFP载体转染NIH3T3细胞,应用荧光显微镜观察、RT-PCR、流式细胞技术(FACS)分析上述细胞中RNAi对目的 基因GFP表达的抑制效果,进一步在个体水平将RNAi载体注入小鼠体内,研究RNAi对GFP表达的抑制情况.结果 RNAi能有效地使NIH3T3细胞中GFP表达量降低约60%以上,并能有效地抑制GFP在转基因小鼠体内的表达.结论 RNAi技术能抑制目的 基因在体内外的表达,是一种有效的基因治疗工具.